動(dòng)物行為學(xué)的研究方法大全11篇

緒論：寫(xiě)作既是個(gè)人情感的抒發(fā)，也是對(duì)學(xué)術(shù)真理的探索，歡迎閱讀由發(fā)表云整理的11篇?jiǎng)游镄袨閷W(xué)的研究方法范文，希望它們能為您的寫(xiě)作提供參考和啟發(fā)。

篇（1）

1.1 抗腦卒中藥物的評(píng)價(jià)

一般用運(yùn)動(dòng)行為實(shí)驗(yàn)對(duì)腦栓塞動(dòng)物模型（如大鼠）進(jìn)行卒中后運(yùn)動(dòng)和協(xié)調(diào)能力的評(píng)價(jià)，從而判定藥物是否對(duì)腦卒中后神經(jīng)損傷恢復(fù)有效。運(yùn)動(dòng)整合及協(xié)調(diào)能力實(shí)驗(yàn)主要包括：平衡木實(shí)驗(yàn)、轉(zhuǎn)棒實(shí)驗(yàn)、肌力實(shí)驗(yàn)、網(wǎng)屏實(shí)驗(yàn)、肢體對(duì)稱(chēng)實(shí)驗(yàn)、肢體放置實(shí)驗(yàn)、前肢放置檢測(cè)、平行杠實(shí)驗(yàn)、爬繩實(shí)驗(yàn)、爬梯實(shí)驗(yàn)、前爪伸屈實(shí)驗(yàn)、步態(tài)分析實(shí)驗(yàn)等。然而，大腦尾狀核、皮層和紋狀區(qū)對(duì)運(yùn)動(dòng) - 感覺(jué)信息的處理和整合起一定作用，這些區(qū)域在大腦中動(dòng)脈梗死后很容易受損，并累及周?chē)鷧^(qū)域如肢體的皮層、額葉和顳葉。因此，目前認(rèn)為缺血損傷后動(dòng)物模型的神經(jīng)行為學(xué)評(píng)價(jià)除了評(píng)估一般感覺(jué)運(yùn)動(dòng)功能，還應(yīng)該將認(rèn)知實(shí)驗(yàn)加入評(píng)估中。有證據(jù)表明，卒中后認(rèn)知缺陷可持續(xù)超過(guò)一般的感覺(jué)運(yùn)動(dòng)缺陷。認(rèn)知實(shí)驗(yàn)主要包括 Morris 水迷宮、放射狀迷宮和 T 迷宮。

腦卒中動(dòng)物模型在不同時(shí)期的行為學(xué)表現(xiàn)不同，因此行為學(xué)評(píng)價(jià)抗腦卒中藥物，相關(guān)行為學(xué)指標(biāo)表現(xiàn)出的敏感性，同時(shí)也存在著廣泛的偏差，組織學(xué)檢查結(jié)果和行為學(xué)實(shí)驗(yàn)相關(guān)，另一些則無(wú)關(guān)或相反。因此，當(dāng)前的評(píng)價(jià)方法尚不能全面的反映腦卒中的生理病理狀態(tài)，這就需要對(duì)模型生理病理指標(biāo)與行為學(xué)指標(biāo)相關(guān)性進(jìn)行研究，綜合多種方法進(jìn)行評(píng)估，尋找最敏感穩(wěn)定的行為學(xué)指標(biāo)。

1.2 抗精神病藥物的評(píng)價(jià)

焦慮模型主要分為 2 類(lèi)：非條件反射模型和條件反射模型。其中比較經(jīng)典的研究方法基于動(dòng)物有畏懼空曠場(chǎng)地的天性和其活動(dòng)具有趨避性而建立的曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)、避暗實(shí)驗(yàn)、高架十字迷宮和 Vogels 飲水沖突模型。

目前抑郁癥行為學(xué)評(píng)價(jià)方法主要包括強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)、懸尾實(shí)驗(yàn)、空?qǐng)鰧?shí)驗(yàn)、獲得性無(wú)助實(shí)驗(yàn)、新奇抑制攝食實(shí)驗(yàn)、糖水偏愛(ài)實(shí)驗(yàn)、間斷性行為實(shí)驗(yàn)、睡眠干擾實(shí)驗(yàn)等。其中，動(dòng)物強(qiáng)迫性游泳和懸尾測(cè)試是評(píng)價(jià)抗抑郁藥作用最常用的方法，因其快速、方便、對(duì)多種抗抑郁藥物有效，被廣為接受和應(yīng)用。然而，也有學(xué)者認(rèn)為動(dòng)物漂浮既可以是抑郁的表現(xiàn)，也可以是一種適應(yīng)機(jī)制，動(dòng)物以此節(jié)約能量，漂浮更長(zhǎng)的時(shí)間，以維持更長(zhǎng)的存活時(shí)間。

由于應(yīng)激是導(dǎo)致焦慮和抑郁發(fā)生的重要原因之一，應(yīng)激對(duì)心理情感、認(rèn)知功能及反應(yīng)判斷能力等行為活動(dòng)均產(chǎn)生影響，研究應(yīng)激致動(dòng)物行為方法主要有社會(huì)交互實(shí)驗(yàn)，動(dòng)物可出現(xiàn)社會(huì)逃避及興趣缺失的抑郁樣行為，此外還有動(dòng)物束縛實(shí)驗(yàn)、糖水偏愛(ài)實(shí)驗(yàn)、條件性防御掩埋實(shí)驗(yàn)、聽(tīng)覺(jué)驚跳實(shí)驗(yàn)等。

1.3 抗衰老藥物的評(píng)價(jià)

神經(jīng)退行性病變是由于神經(jīng)元進(jìn)行性變性死亡導(dǎo)致的以中樞神經(jīng)系統(tǒng)損害為主的神經(jīng)系統(tǒng)疾病，與年齡相關(guān)的大腦退行性變化是大腦中樞神經(jīng)系統(tǒng)在生長(zhǎng)、發(fā)育、成熟之后走向衰老過(guò)程中而表現(xiàn)的生物老化的正常生理現(xiàn)象。其最突出的臨床表現(xiàn)是記憶和學(xué)習(xí)能力下降，因此抗衰老藥物行為學(xué)評(píng)價(jià)主要考察對(duì)學(xué)習(xí)記憶障礙的作用。主要研究方法包括空間記憶和非空間記憶，在空間學(xué)習(xí)記憶中，采用 Morris 水迷宮、八臂迷宮、T 型迷宮、輻射式迷宮等方法。近年來(lái)新的認(rèn)知方法出現(xiàn)，可以對(duì)空間學(xué)習(xí)記憶和非空間學(xué)習(xí)記憶進(jìn)行測(cè)試，如物體認(rèn)知測(cè)試系統(tǒng)，包含新物體的識(shí)別、新物置識(shí)別以及情景記憶和時(shí)序記憶。其中新物體的識(shí)別、情景記憶和時(shí)序記憶屬于空間記憶；新物置識(shí)別屬于非空間記憶。在條件反射方法中，非條件刺激可以是懲罰性的也可以是獎(jiǎng)勵(lì)性的。使用懲罰性條件刺激的行為檢測(cè)方法如穿梭、跳臺(tái)、避暗等已被廣泛應(yīng)用于學(xué)習(xí)記憶和鞏固相關(guān)行為研究。但這些方法檢測(cè)的學(xué)習(xí)記憶能力大多是基于對(duì)環(huán)境刺激的被動(dòng)反應(yīng)，而且需要給予懲罰性 / 傷害性刺激使動(dòng)物完成學(xué)習(xí)記憶，對(duì)動(dòng)物的生理及心理影響較大，同時(shí)影響神經(jīng)遞質(zhì)的釋放。而利用獎(jiǎng)勵(lì)物質(zhì)的獎(jiǎng)賞效應(yīng)，大腦會(huì)向負(fù)責(zé)決策的區(qū)域發(fā)送獎(jiǎng)賞信號(hào)，形成好的記憶。獎(jiǎng)賞效應(yīng)能使機(jī)體的認(rèn)知能力進(jìn)一步提升，形成良性循環(huán)，易化條件反射的形成。

1.4 其他藥物的評(píng)價(jià)

神經(jīng)行為學(xué)方法除了主要用于以上藥物的評(píng)價(jià)，還用于抗疲勞藥物、促進(jìn)睡眠藥物以及鎮(zhèn)痛藥物的評(píng)價(jià)中，抗疲勞藥物大多具有興奮中樞神經(jīng)系統(tǒng)的作用，行為學(xué)檢測(cè)主要采用游泳實(shí)驗(yàn)、轉(zhuǎn)棒實(shí)驗(yàn)。促進(jìn)睡眠藥物主要采用閾下催眠實(shí)驗(yàn)。鎮(zhèn)痛藥物根據(jù)作用部位不同可分為中樞鎮(zhèn)痛藥和外周鎮(zhèn)痛藥，用于評(píng)價(jià)外周藥物鎮(zhèn)痛作用的方法主要有小鼠醋酸扭體實(shí)驗(yàn)；評(píng)價(jià)中樞鎮(zhèn)痛藥物的方法熱板法、熱輻射甩尾實(shí)驗(yàn)以及福爾馬林測(cè)痛實(shí)驗(yàn)，目前新的研究方法有步態(tài)行為測(cè)試，通過(guò)研究動(dòng)物運(yùn)動(dòng)的步態(tài)及足底壓力評(píng)價(jià)藥物的治療作用。

2 神經(jīng)行為學(xué)在藥物安全性評(píng)價(jià)的應(yīng)用

2.1 在一般毒性評(píng)價(jià)中的應(yīng)用

神經(jīng)行為學(xué)實(shí)驗(yàn)可以發(fā)現(xiàn)一些神經(jīng)毒性的相關(guān)終點(diǎn)，長(zhǎng)期毒性實(shí)驗(yàn)中增加對(duì)特異性終點(diǎn)的評(píng)價(jià)，可以提高實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的利用率，縮短危險(xiǎn)評(píng)價(jià)所用的時(shí)間，并獲得額外的數(shù)據(jù)。如評(píng)價(jià)抗抑郁藥物的長(zhǎng)期毒性實(shí)驗(yàn)可增加對(duì)動(dòng)物自主活性的觀察指標(biāo)。而在一些不確定是否有神經(jīng)毒性的創(chuàng)新藥物評(píng)價(jià)中，神經(jīng)毒性篩查也可與長(zhǎng)期毒性實(shí)驗(yàn)相組合，篩查的目的在于確定是否需要進(jìn)行附加的更加深入的神經(jīng)毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)，如步態(tài)異常有助于毒性部位的確定，例如下運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元疾病可致跨越步態(tài)；剪形步態(tài)和僵硬步態(tài)說(shuō)明上運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元損害；小腦功能不良可致共濟(jì)失調(diào)及步態(tài)蹣跚。關(guān)于神經(jīng)系統(tǒng)的毒性特征，猶如靶器官毒性一樣，能隨染毒期限的長(zhǎng)短表現(xiàn)不同。神經(jīng)毒性作用的意義取決于它的可逆性，一般來(lái)說(shuō)，不可逆作用較可逆作用嚴(yán)重，神經(jīng)系統(tǒng)的區(qū)域?qū)ι砉δ苡绊戄^其他系統(tǒng)更為重要。

2.2 在安全性藥理評(píng)價(jià)中的應(yīng)用

由于毒物對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)的作用范圍很廣，一般采用功能組合實(shí)驗(yàn)來(lái)評(píng)價(jià)藥物對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)的安全性。目前動(dòng)物神經(jīng)行為測(cè)試還沒(méi)有一套標(biāo)準(zhǔn)模式的神經(jīng)行為功能測(cè)試組合，只是經(jīng)濟(jì)合作與發(fā)展組織（OECD）在感覺(jué)、運(yùn)動(dòng)、認(rèn)知等方面推薦了一些測(cè)試方法，綜合評(píng)價(jià)被測(cè)化學(xué)物質(zhì)的神經(jīng)行為毒性。國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局（CFDA）規(guī)定中樞神經(jīng)系統(tǒng)藥物安全性評(píng)價(jià)可定性和定量評(píng)價(jià)給藥后動(dòng)物的運(yùn)動(dòng)功能、行為改變、協(xié)調(diào)功能、感覺(jué) / 運(yùn)動(dòng)反射和體溫的變化等，以確定藥物對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)的影響。當(dāng)核心組合實(shí)驗(yàn)及文獻(xiàn)報(bào)道提示藥物存在潛在的與人體安全性有關(guān)的不良反應(yīng)時(shí)，應(yīng)進(jìn)行追加和 /或補(bǔ)充的安全藥理學(xué)研究。追加的安全藥理實(shí)驗(yàn)是除了核心組合實(shí)驗(yàn)外，反映受試物對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)和呼吸系統(tǒng)的深入研究。如追加的安全藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)的影響包括對(duì)行為、學(xué)習(xí)記憶、神經(jīng)生化、視覺(jué)、聽(tīng)覺(jué)和 / 或電生理等指標(biāo)的檢測(cè)。

2.3 藥物依賴(lài)性的評(píng)價(jià)

幾乎所有的依賴(lài)性藥物，如阿片、酒精、可卡因、苯丙胺、尼古丁等都會(huì)使濫用成癮者戒斷后出現(xiàn)情緒問(wèn)題，包括抑郁、焦慮、缺乏等，是藥物依賴(lài)患者急性或慢性戒斷期常見(jiàn)的特征，也是引起藥物依賴(lài)者對(duì)藥物產(chǎn)生心理依賴(lài)和復(fù)吸的重要原因。藥物依賴(lài)與沖動(dòng)行為有著密切的聯(lián)系，藥物依賴(lài)能夠使沖動(dòng)行為發(fā)生變化；同時(shí)可以誘導(dǎo)動(dòng)機(jī)獎(jiǎng)賞系統(tǒng)及學(xué)習(xí)記憶相關(guān)腦區(qū)內(nèi)神經(jīng)元結(jié)構(gòu)發(fā)生可塑性改變，該變化在停藥后仍可長(zhǎng)期存在。對(duì)于精神依賴(lài)性由于是機(jī)體對(duì)藥物內(nèi)在的感知綜合體現(xiàn)，如動(dòng)物心理滿足感、欣，同時(shí)，本身沖動(dòng)性不同的個(gè)體對(duì)依賴(lài)藥物的易感性存在個(gè)體差異。實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)難度較大，目前評(píng)價(jià)方法主要結(jié)合抑郁、焦慮、學(xué)習(xí)記憶等神經(jīng)行為學(xué)方法進(jìn)行研究，其中應(yīng)用較多的是操作式行為實(shí)驗(yàn)方法，如獎(jiǎng)賞實(shí)驗(yàn)及采用自身給藥模擬人的覓藥行為和藥物辨別行為，因該方法需要儀器設(shè)備復(fù)雜，實(shí)驗(yàn)周期較長(zhǎng)。目前廣泛用于藥物精神依賴(lài)的評(píng)價(jià)方法是條件位置偏愛(ài)實(shí)驗(yàn)，該方法經(jīng)濟(jì)簡(jiǎn)便。

2.4 在發(fā)育神經(jīng)毒性評(píng)價(jià)中的應(yīng)用

篇（2）

通過(guò)這次的《組織行為學(xué)》講座，我了解到組織行為學(xué)是研究組織中人的行為與心理規(guī)律的一門(mén)科學(xué)，其實(shí)更是一直與人溝通與人交流的一種方式和方法。它是行為科學(xué)的一個(gè)分支，隨著社會(huì)的發(fā)展，尤其是經(jīng)濟(jì)的發(fā)展促使了企業(yè)和組織的發(fā)展進(jìn)步，組織行為學(xué)越來(lái)越受到人們的重視。“溝通，從心開(kāi)始”為主題的講座，令深深感受到組織行為學(xué)的魅力，建立有效溝通，完善工作方法。

通過(guò)課程，使我更加客觀的看待每個(gè)人自身的優(yōu)點(diǎn)和缺點(diǎn)，然而不是所有的人在任何時(shí)候都會(huì)揚(yáng)長(zhǎng)避短、知己克己、取長(zhǎng)補(bǔ)短，在生活、工作中，我們有可能不了解自己，不了解他人，不了解某個(gè)場(chǎng)合的某種情況，所以會(huì)有生活、工作中的種種不順心或者不愉快，小矛盾、大干戈油然而生。而事后，我們靜下來(lái)的時(shí)候也許還會(huì)抱怨，也許會(huì)反思，自己的不對(duì)或他人的不是。這其中就涉及到組織行為學(xué)中許多觀點(diǎn)。在現(xiàn)實(shí)的工作群體中，我們首先要進(jìn)行反思自身問(wèn)題，善待他人，他人也會(huì)善待自己。我們每個(gè)個(gè)體是相互交融在一起的，無(wú)論是家庭的一員還是作為團(tuán)隊(duì)的一員，我們要處理好團(tuán)體與個(gè)體關(guān)系，切同存異，實(shí)現(xiàn)共同進(jìn)步。

人是理性動(dòng)物，也更是感情動(dòng)物。很多時(shí)候人做事情都是會(huì)被感情所左右的，要想通過(guò)溝通達(dá)成意見(jiàn)的一致就要學(xué)會(huì)傾聽(tīng)別人的想法，也要站在別人的立場(chǎng)上去思考問(wèn)題。心存他人，尊重他人，這樣才可以得到他人的尊重和認(rèn)可。當(dāng)做一件事情或完成一個(gè)任務(wù)，各部門(mén)或各人之間有分歧的時(shí)候，需要去積極溝通和化解分歧，但是溝通并不等于只去表達(dá)你自己的認(rèn)知和看法，以得到別人的贊同，而是要用一種尊重的態(tài)度去聆聽(tīng)各部門(mén)或每個(gè)人的觀點(diǎn)，然后結(jié)合自己的想法找出分歧之處，，用最好的方式去向?qū)Ψ奖磉_(dá)你的觀點(diǎn)和看法，最后征求對(duì)方的意見(jiàn)已達(dá)到最后的一致。

最后要感謝王延駿和李可永等教授和老師辛苦授課和講解，也衷心的感謝新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)精心為我們組織了一次“溝通，從現(xiàn)在開(kāi)始”的為主題的講座，讓我們更深入了解了組織行為學(xué)的魅力和精髓所在。

篇（3）

中圖分類(lèi)號(hào)：TS262.5　文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A　文章編號(hào)：1674－0432(2011)－05－0085－1

1　材料與方法

1.1材料

1.1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物普通昆明種小鼠，雌雄各半，20+2g，標(biāo)準(zhǔn)環(huán)境喂養(yǎng)(北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供)。

1.1.2實(shí)驗(yàn)試劑乙醇(北京化工廠，分析純)；異戊醇(天津津科精細(xì)化工研究所，分析純)；異丁醇(東京化工株式會(huì)社，分析醇)；正丙醇、正丁醇(德國(guó)FLUKA公司，分析純)；甲酸、乙酯、乙酸乙酯、已酸乙酯、乙酸異戊酯、乙酸異丁酯

1.1.3實(shí)驗(yàn)儀器滾筒運(yùn)動(dòng)測(cè)試儀(RB－200B型)；1 ml針筒注射器(國(guó)營(yíng)常州注射器廠)

1.2方法

1.2.1灌胃高級(jí)醇、酯類(lèi)配比高級(jí)醇成分配比：異戊醇50％，異丁醇30％，正丙醇15％，正丁醇5％。酯類(lèi)成分配比：甲酸乙酯25％，乙酸乙酯50％，已酸乙酯5％，乙酸異戊酯10％7,酸異丁酯10％。

1.2.2滾筒實(shí)驗(yàn)昆明小白鼠，20±2g，雌雄各半，隨機(jī)分為對(duì)照組，3個(gè)灌胃酯溶液組和3個(gè)灌胃高級(jí)醇溶液組，劑量分別為0.5ml／20g，1.0ml／20g，2.0ml／20g。每組15只，通電后，小鼠在滾筒中滾動(dòng)，記錄10分鐘內(nèi)掉筒及爬筒次數(shù)。

1.2.3統(tǒng)計(jì)學(xué)分析結(jié)果用iS表示，并采用excell進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

2　結(jié)果與討論

2.1酯類(lèi)對(duì)小鼠行為學(xué)的影響

啤酒在發(fā)酵過(guò)程會(huì)產(chǎn)生大量酯類(lèi)并在貯存過(guò)程酯類(lèi)會(huì)有所增加。表1可以看出，每組劑量下，小鼠的掉筒次數(shù)會(huì)隨著酯類(lèi)濃度的增加而增加，但經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，不同含量酯類(lèi)物質(zhì)在不同給藥劑量下對(duì)小鼠掉筒次數(shù)影響并不顯著，說(shuō)明酯類(lèi)對(duì)小鼠行為有一定的興奮作用，但這種刺激作用不強(qiáng)烈。

2.2高級(jí)醇對(duì)小鼠行為學(xué)的影響

經(jīng)實(shí)驗(yàn)表明對(duì)小鼠進(jìn)行高級(jí)醇灌胃后有頭暈感，當(dāng)高級(jí)醇含量超過(guò)100ppm，這種影響非常顯著。由表2分析，正常小鼠灌胃空白2ml后，意識(shí)清醒。在5分鐘內(nèi)，平均掉筒次數(shù)1.73±0.75，

掉筒后在電擊作用下重新爬上滾筒。灌胃高級(jí)醇30ppm，隨劑量增加掉筒次數(shù)增加不明顯。

灌胃高級(jí)醇70ppm，1ml，掉筒顯著(P

篇（4）

中圖分類(lèi)號(hào)：G804．7 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1007―3612(2(107)01―0038－03

投稿日期：2005－03－08

基金項(xiàng)目：本研究獲得華東師范大學(xué)2004年優(yōu)秀博士生培養(yǎng)基金、河北省科學(xué)技術(shù)研究與發(fā)展計(jì)劃項(xiàng)目(編號(hào)：042461600D)和河北師范大學(xué)青年基金(編號(hào)：L2004Q17)資助。

作者簡(jiǎn)介：崔冬雪(1974－)，女，博士，副教授，研究方向體育鍛煉與身心健康。

抑郁癥的發(fā)病率隨著人們生活水平的提高、工作生活壓力的增加呈逐年上升趨勢(shì)。專(zhuān)家預(yù)測(cè)2020年抑郁癥將成為人類(lèi)的第二殺手。抑郁癥給患者及其家人帶來(lái)了極大的痛苦。對(duì)于抑郁癥的治療，也花費(fèi)了大量的財(cái)力、物力、人力。因而，預(yù)防抑郁癥的發(fā)生也就顯得尤為重要。鍛煉心理學(xué)的研究成果表明，運(yùn)動(dòng)鍛煉具有改善消除人們的不良情緒的作用，提示對(duì)于抑郁癥的發(fā)病有一定的預(yù)防作用。基于此，以動(dòng)物為研究對(duì)象，探討游泳鍛煉對(duì)處在慢性應(yīng)激期間動(dòng)物行為學(xué)指標(biāo)和腎上腺、海馬組織以及血漿皮質(zhì)酮水平的影響，闡釋鍛煉預(yù)防抑郁癥的部分機(jī)制。

1　材料與方法

1．1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組健康雄性SD大鼠，體重130～150 g，上海醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物機(jī)構(gòu)許可證號(hào)：SCXK(滬)2003－0002。在自由飲食、光，暗周期為12 h／12 h(光照時(shí)間06：00―18：00)、背景噪音為40±10 dB、溫度為21±3℃、濕度為60％－70％的條件下飼養(yǎng)。

所有動(dòng)物適應(yīng)飼養(yǎng)1周，期間進(jìn)行蔗糖溶液消耗訓(xùn)練，1周后測(cè)定動(dòng)物體重、食物消耗量、1％蔗糖溶液消耗量及OPEN－FIELD TEST行為學(xué)得分，選擇各指標(biāo)相近的動(dòng)物60只，隨機(jī)分為對(duì)照組(C)、運(yùn)動(dòng)組(E)、模型組(M)、運(yùn)動(dòng)應(yīng)激組(ES)和運(yùn)動(dòng)應(yīng)激運(yùn)動(dòng)組(ESE)，12只／組。其中E組在實(shí)驗(yàn)途中丟失1只，59只動(dòng)物數(shù)據(jù)進(jìn)入最后結(jié)果分析。

1．2實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)共進(jìn)行14周。C組、M組：第1周－第10周正常飼養(yǎng)，6只／籠。E組、ES組、ESE組：第1周，前3d游泳10 min／d，后3 d游泳20 min／d；第2周，前3 d游泳30 min／d，后3 d游泳40min／d；第3周，前3 d游泳50min／d，后3天游泳60min／d；第4―10周，6 d，周、60 min／天的游泳鍛煉。第11周一第14周：C組正常飼養(yǎng)，6只／籠；E組6 d，周、60 min／d的游泳鍛煉。M組、ES組、ESE組接受包括電擊足底(電壓40 v，每次10 S，間隔50 S，刺激1次，共30次)、冰水游泳(4℃，5min)、熱應(yīng)激(45％，5 min)、夾尾(止血鉗，距尾根1 cm，1 min)、禁水、禁食、晝夜顛倒、明暗交替(1 h照明，l h黑暗，進(jìn)行12h)、擁擠等刺激組成的慢性中等不可預(yù)知應(yīng)激刺激，1只／籠；期間ES組停止鍛煉、ESE組繼續(xù)鍛煉，所有應(yīng)激動(dòng)物均獨(dú)自接受應(yīng)激刺激。

1．3動(dòng)物行為學(xué)指標(biāo)測(cè)試Open―Field TeSt行為測(cè)試：將動(dòng)物置入80 cm×80 cm×40 cm周壁、箱底為黑色、底面積由25塊相等的16 cm×16 cm正方形組成，以白線劃分的行為箱正中央格后開(kāi)始測(cè)定，每次測(cè)定3 min，以穿越底面積塊數(shù)為水平活動(dòng)得分，直立次數(shù)為垂直活動(dòng)得分。每只動(dòng)物只進(jìn)行一次行為測(cè)定，測(cè)定完畢，糞便清理干凈后，進(jìn)行下一只測(cè)定。測(cè)試過(guò)程采用攝像機(jī)記錄，全部拍攝完畢后，進(jìn)行錄像回放，記錄動(dòng)物活動(dòng)得分。記錄動(dòng)物活動(dòng)得分采用單盲法。

1％蔗糖溶液消耗量：測(cè)定前禁水、禁食24h，每周四晚18：00－19：00測(cè)定動(dòng)物1h飲用1％蔗糖溶液的量。測(cè)定前、后水瓶的重量差為動(dòng)物1h飲用1％蔗糖溶液的量。1％蔗糖溶液消耗量以1h攝入1％蔗糖溶液的量(mg)，動(dòng)物體重(g)進(jìn)行評(píng)定。

食物消耗量：每周六晨6：00給動(dòng)物鼠籠食槽中放入50g動(dòng)物飼料，同時(shí)將群養(yǎng)的動(dòng)物分籠，1只／籠。次晨6：00稱(chēng)量剩余飼料，計(jì)算出每只動(dòng)物24 h的食物消耗量，食物消耗量以24 h的攝入食物量(mg)，動(dòng)物體重(g)來(lái)評(píng)定。

1．4組織樣品制備及熒光分光光度法測(cè)定皮質(zhì)酮 海馬和腎上腺組織樣品制備：大鼠斷頭處死后，迅速剝?nèi)∪X，腦組織用冰生理鹽水沖洗，去除腦膜，在冰皿中分離海馬(根據(jù)大鼠腦立體定位圖譜進(jìn)行定位)，用濾紙吸干水分并稱(chēng)重，低溫保存、待測(cè)。剖腹取出大鼠的腎上腺組織，用生理鹽水將組織中的血液沖洗干凈，用濾紙將組織中的水分吸掉，剔除周?chē)闹窘M織稱(chēng)重，并記錄，低溫保存、待測(cè)。

血漿樣品制備：大鼠斷頭取血，將血液裝入加有20 uL／mL全血的0．3M EDTA?2Na溶液抗凝劑的采血管中，輕緩混勻迅速低溫離心(4℃；／4000rp，離心20 min)，取血漿低溫保存，待測(cè)。

皮質(zhì)酮標(biāo)準(zhǔn)品購(gòu)自Sigma公司，其它試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純。將制備好的樣品按照參考文獻(xiàn)的方法進(jìn)行處理后，在日本日立F－4500熒光光度計(jì)測(cè)定樣品中皮質(zhì)酮的熒光強(qiáng)度，通過(guò)制作標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算組織中皮質(zhì)酮的含量。

1．5數(shù)據(jù)處理所有數(shù)據(jù)均以平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，采用SPSS10．0 for windowS數(shù)據(jù)處理軟件進(jìn)行分析。數(shù)據(jù)進(jìn)行ANO-VA方差分析和T檢驗(yàn)處理，以P＜0．05為相差顯著。

2　結(jié)果

2．1實(shí)驗(yàn)不同階段動(dòng)物行為學(xué)指標(biāo)測(cè)定結(jié)果

2．1．1　第10周各組動(dòng)物行為學(xué)指標(biāo)測(cè)定結(jié)果實(shí)驗(yàn)的前10周動(dòng)物可以根據(jù)有無(wú)游泳鍛煉分為兩組，即運(yùn)動(dòng)組和非運(yùn)動(dòng)組，探討游泳鍛煉對(duì)動(dòng)物行為學(xué)指標(biāo)的影響。T檢驗(yàn)表明，動(dòng)物的食物消耗量和10周的體重增長(zhǎng)量在顯著性差異(P＜

0．05)，其他指標(biāo)間均無(wú)差異(P＞0．05)。

2．1．2實(shí)驗(yàn)結(jié)束后各組動(dòng)物生理、行為指標(biāo)測(cè)定結(jié)果實(shí)驗(yàn)后4周，慢性中等不可預(yù)知應(yīng)激刺激與游泳鍛煉共同作用導(dǎo)致各組動(dòng)物行為學(xué)指標(biāo)的變化。動(dòng)物體重增長(zhǎng)量為后4周動(dòng)物體重的增長(zhǎng)量，其他指標(biāo)均為結(jié)束時(shí)測(cè)定的結(jié)果。方差分析顯示：M組動(dòng)物體重增長(zhǎng)量、食物消耗量、1％蔗糖溶液消耗量和Open―Field行為指標(biāo)顯著低于C組和E組(P＜0．01，P＜0．05)。ES組和ESE組的動(dòng)物體重增長(zhǎng)量、食物消耗量、1％蔗糖溶液消耗量顯著高于M組(P＜0．01，P＜0．05)，Open―Field行為指標(biāo)部分低于M組(P＜0．01，P＜0．05)。

2．2皮質(zhì)酮測(cè)定結(jié)果方差分析顯示，血漿、腎上腺和海馬組織中皮質(zhì)酮的含量M組顯著高于c組和E組(P＜0．01)；E組顯著低于C組(P＜0．01)。ES組和ESE組在游泳鍛煉和慢性應(yīng)激刺激雙重影響下，皮質(zhì)酮在動(dòng)物體內(nèi)發(fā)生了變化。血漿皮質(zhì)酮含量分析顯示：ESE組顯著低于M組和ES組(P＜0．01)；ES組動(dòng)物顯著高于E組(P＜0．01)。腎上腺組織皮質(zhì)酮含量分析顯示：ES組和ESE組顯著低于M組(P＜0．01，P＜0．05)；ES組顯著高于E組和KSE組(P＜0．01)。海馬組織皮質(zhì)酮含量分析顯示：ES組與ESE組顯著低于M組高于E組(P＜0．01，P＜0．05)。

3　討論

3．1慢性應(yīng)激抑郁模型的討論 到目前為止，已有20多種公認(rèn)的方法可作為抑郁癥研究的動(dòng)物模型，他們可以分為應(yīng)激模型、孤養(yǎng)模型、藥理學(xué)模型、嗅結(jié)節(jié)切除模型等。從人類(lèi)抑郁癥發(fā)病的實(shí)際情況來(lái)看，應(yīng)激性生活事件是抑郁癥的明顯促發(fā)因素。因此，以應(yīng)激模擬造成抑郁癥的環(huán)境來(lái)制作抑郁動(dòng)物模型，其發(fā)病機(jī)理可能與人類(lèi)抑郁癥更接近。本實(shí)驗(yàn)參照文獻(xiàn)方法，利用長(zhǎng)期不可預(yù)見(jiàn)到的中等強(qiáng)度應(yīng)激刺激和動(dòng)物孤養(yǎng)，造成動(dòng)物抑郁狀態(tài)。慢性中等不可預(yù)見(jiàn)性應(yīng)激抑郁模型是目前應(yīng)用和研究較多的抑郁癥模型，其理論依據(jù)與人類(lèi)抑郁癥中慢性、低水平的應(yīng)激源導(dǎo)致抑郁癥的發(fā)生，并加速抑郁癥發(fā)展的機(jī)理更接近。此模型表現(xiàn)出動(dòng)物情緒抑郁狀態(tài)、興趣喪失、缺乏與抑郁癥狀臨床診斷中的精神運(yùn)動(dòng)改變、興趣或的喪失有一定程度的相似性，能較為真實(shí)地模擬抑郁癥病人的某些癥狀和病因，可用于抗抑郁藥物作用機(jī)制和抑郁癥的病理生理機(jī)制研究。

3．2運(yùn)動(dòng)量的設(shè)計(jì)討論動(dòng)物進(jìn)行游泳鍛煉的安排模擬了人的健身鍛練，運(yùn)動(dòng)量由小到大逐漸增加，直到達(dá)到一個(gè)適宜范圍進(jìn)而鞏固。大鼠游泳時(shí)間從10 win開(kāi)始，每10 min遞增，直到60 min，需要3周的時(shí)間過(guò)渡。每一個(gè)時(shí)間進(jìn)行3次的鍛煉適應(yīng)，到60 min達(dá)到穩(wěn)定進(jìn)而保持該運(yùn)動(dòng)量到實(shí)驗(yàn)結(jié)束。與人實(shí)際鍛煉的過(guò)程相吻合，遵循了運(yùn)動(dòng)鍛煉中的漸進(jìn)性原則。

3．3熒光分光光度法測(cè)定皮質(zhì)酮的討論 測(cè)定皮質(zhì)酮的方法較多，目前較為常用的有熒光分光光度法、放射免疫法、酶免法等。熒光分光光度法與其他方法相比，存在一定的不足，其精度沒(méi)有其它方法精確，特異性強(qiáng)。可能會(huì)受到其它同類(lèi)物質(zhì)(皮質(zhì)醇)的干擾，但是其操作簡(jiǎn)便、儀器設(shè)備要求較低，費(fèi)用消耗較低。另外，由于在大鼠體內(nèi)應(yīng)激激素以皮質(zhì)酮激素為主，與皮質(zhì)醇的比值為20：1，所以用熒光分光光度法測(cè)定皮質(zhì)酮的含量，可以反映動(dòng)物體內(nèi)皮質(zhì)酮的變化趨勢(shì)，能夠說(shuō)明研究的問(wèn)題，因而可以采用。

3．4實(shí)驗(yàn)不同階段各組動(dòng)物行為學(xué)指標(biāo)測(cè)試結(jié)果分析 經(jīng)過(guò)10周的游泳鍛煉后，運(yùn)動(dòng)組與非運(yùn)動(dòng)組只有體重增長(zhǎng)量和食物消耗量組間存在顯著性差異，其它指標(biāo)間則不存在差異。表明：游泳鍛煉對(duì)于體重增長(zhǎng)量有著良好的控制作用，可能是游泳鍛煉增加了機(jī)體能量的消耗，不易造成能量的積累，致使體重增加緩慢。此作用在人類(lèi)大眾健身中也得以體現(xiàn)，并作為健身、減肥、重塑身體外形的重要手段之一。

游泳鍛煉對(duì)大鼠而言是一種應(yīng)激刺激，開(kāi)始時(shí)可能對(duì)其本身及行為學(xué)產(chǎn)生一定的影響，但是隨著游泳鍛煉時(shí)間的延長(zhǎng)，動(dòng)物對(duì)此應(yīng)激產(chǎn)生了脫敏，進(jìn)一步適應(yīng)了游泳鍛煉。游泳鍛煉10周后，各指標(biāo)的結(jié)果也表明動(dòng)物對(duì)游泳鍛煉的適應(yīng)。

大鼠遭受慢性應(yīng)激后的行為與抑郁癥病人的臨床表現(xiàn)有相關(guān)性，如大鼠在Open―Field行為箱中活動(dòng)減少反映了抑郁癥病人精神運(yùn)動(dòng)遲滯的癥狀，大鼠1％蔗糖溶液攝入量的減少反映了抑郁癥患者興趣缺失，并且二者都有體重下降等。實(shí)驗(yàn)后4周，慢性應(yīng)激介入，動(dòng)物各組間發(fā)生了顯著性變化。M組動(dòng)物體重增長(zhǎng)減慢，甚至出現(xiàn)負(fù)增長(zhǎng)，興趣缺失，行為活動(dòng)減少，模擬了人類(lèi)抑郁癥的臨床表現(xiàn)，表明模型制備成功。ES組、ESE組與M組相比在體重增長(zhǎng)量、食物和1％蔗糖溶液消耗量方面呈顯著差異。表明游泳鍛煉可以拮抗部分應(yīng)激所致不良影響，同時(shí)也表明游泳鍛煉的功效是有一定限制的。

生物、心理、社會(huì)醫(yī)學(xué)模式認(rèn)為：人的心理與生理、精神與軀體、機(jī)體內(nèi)外環(huán)境是一個(gè)完整的統(tǒng)一體，心理、社會(huì)因素與疾病的發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)歸有著密切的聯(lián)系，在考察人類(lèi)的健康和疾病時(shí)，既要考慮生物學(xué)因素，又要重視心理社會(huì)因素的影響。抑郁癥的發(fā)病不僅僅心理因素為其致病因素，同樣生理因素如疾病亦是其致病因素之一。在本研究中所用應(yīng)激刺激強(qiáng)度為中等強(qiáng)度，對(duì)于機(jī)體產(chǎn)生損傷的幾率較低，其中主要為精神因素所致，因無(wú)法擺脫刺激，精神處于極度緊張狀態(tài)。正如人類(lèi)在社會(huì)生活中遇到的應(yīng)激刺激對(duì)人類(lèi)本身所產(chǎn)生的影響一樣。

3．5各組動(dòng)物腎上腺、海馬組織和血漿中皮質(zhì)酮含量變化分析反復(fù)的心理應(yīng)激可使血液中皮質(zhì)酮持續(xù)升高，引起血液中糖皮質(zhì)激素積累，造成內(nèi)分泌代謝過(guò)分增加。本研究結(jié)果顯示，M組動(dòng)物血漿、腎上腺和海馬組織中皮質(zhì)酮的含量均高于其他四組，可能是長(zhǎng)時(shí)間的、不可預(yù)知的、應(yīng)激刺激致使皮質(zhì)酮持續(xù)升高，糖皮質(zhì)激素積累，造成內(nèi)分泌代謝過(guò)分增加的結(jié)果。提示M組動(dòng)物對(duì)慢性應(yīng)激刺激產(chǎn)生了不適，動(dòng)物處于慢性應(yīng)激狀態(tài)，出現(xiàn)內(nèi)分泌功能失衡。結(jié)合在慢性應(yīng)激期間隨著時(shí)間延長(zhǎng)，動(dòng)物食欲減少、體重增長(zhǎng)緩慢、毛色枯黃、精神抑郁等行為表現(xiàn)，推測(cè)M組動(dòng)物處于抑郁狀態(tài)，支持了抑郁癥患者的皮質(zhì)醇含量較高的觀點(diǎn)。

持續(xù)14周的游泳鍛煉可以使動(dòng)物腎上腺、海馬組織和血漿中皮質(zhì)酮的水平顯著低于對(duì)照組，與已有研究結(jié)果一致。表明適度的鍛練對(duì)皮質(zhì)酮的釋放有良性的調(diào)節(jié)作用，能抵抗糖皮質(zhì)激素的過(guò)量分泌。ES組和ESE組動(dòng)物皮質(zhì)酮的含量均低于M組，可能是慢性中等應(yīng)激和游泳鍛煉產(chǎn)生了交互作用，游泳鍛煉拮抗應(yīng)激所致消極影響的結(jié)果。提示適宜的運(yùn)動(dòng)鍛煉可以提高機(jī)體對(duì)抗應(yīng)激的能力，這也許是游泳鍛煉預(yù)防抑郁發(fā)生的一種可能機(jī)制。

皮質(zhì)酮水平在海馬組織中的變化有著重要的意義。研究發(fā)現(xiàn)，海馬富含糖皮質(zhì)激素受體(GR)，而且是中樞GR含量最多的腦區(qū)，由于GCs與GR過(guò)量結(jié)合會(huì)對(duì)海馬產(chǎn)生不利影響，因此，應(yīng)激和HPA軸機(jī)能亢進(jìn)時(shí)，海馬極易受到高水平的GCs攻擊，影響其正常的生理功能，甚至使其受到損傷。大量資料表明，海馬有大量神經(jīng)纖維投射到下丘腦，影響下丘腦的分泌功能，并參與HPA軸的負(fù)反饋調(diào)節(jié)。同時(shí)運(yùn)動(dòng)鍛煉降低應(yīng)激刺激導(dǎo)致海馬組織中皮質(zhì)酮水平的升高，可能是運(yùn)動(dòng)鍛煉預(yù)防抑郁癥發(fā)生的途徑。

4　結(jié)論

篇（5）

   

抑郁癥是一種常見(jiàn)的情緒障礙性疾病，表現(xiàn)為一種持久的抑郁狀態(tài)，以心境低落、軀體不適和睡眠障礙等為主要癥狀［1］。是危害全人類(lèi)身心健康的常見(jiàn)病，其終生患病率為6.1%～9.5%［2］。據(jù)專(zhuān)家預(yù)測(cè)，到2020年，精神疾病在人們的疾病負(fù)擔(dān)中將列首位，而抑郁癥則占精神科疾病的47%［3］。抑郁癥及其治療引起內(nèi)外廣大學(xué)者的廣泛重視。本研究旨在通過(guò)觀察針刺對(duì)抑郁模型大鼠行為學(xué)的影響，評(píng)定針刺抗抑郁療效。

1  器材

1.1  藥品多慮平：南京白敬宇制藥廠產(chǎn)品，批號(hào)：20040912。

1.2  動(dòng)物（200±20）g Wistar雄性大鼠，由山東大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，合格證號(hào)：魯動(dòng)質(zhì)字：20040816。

1.3  器材“華佗”牌32號(hào)1.0寸針灸針，蘇州醫(yī)療用品廠產(chǎn)品；穿梭箱：山東中醫(yī)藥大學(xué)中西醫(yī)結(jié)合基礎(chǔ)研究室提供，根據(jù)文獻(xiàn)介紹制備［4］，大鼠穿梭箱有兩室，每室30 cm×30 cm× 20 cm，可人為開(kāi)閉，箱底為不銹鋼柵條，條間距離為1 cm，兩室柵條可錯(cuò)時(shí)通電，一室與刺激器接通時(shí)，另一室為安全室；敞箱：根據(jù)文獻(xiàn)介紹，自行制備［5］，標(biāo)準(zhǔn)為40 cm×80 cm×80 cm，周壁、底面為黑色，底面以白線劃分為面積相等的25塊。

2  方法

2.1  模擬臨床建立大鼠學(xué)習(xí)無(wú)助模型將大鼠放入穿梭箱，中間通道關(guān)閉，通過(guò)底部的金屬柵條給予220V，0.8 mA的方波刺激，刺激15 s，間隔45 s/次，共60次，總刺激時(shí)間15 min，進(jìn)行不可逃避的電休克即前休克動(dòng)物（pre-shocked  animals）制作［1］。

2.2  分組及給藥(200±20)g  Wistar雄性大鼠40只，按體重均衡隨機(jī)分為空白對(duì)照組、模型對(duì)照組、陽(yáng)性藥多慮平組、針刺組，每組10只。空白組及模型對(duì)照組分別給予涼開(kāi)水1 ml/100 g，ig；多慮平對(duì)照組給予多慮平3 mg/kg，生理鹽水配成30%水溶液1 ml/100g·ig ；空白對(duì)照組大鼠只放入穿梭箱內(nèi)而不進(jìn)行電刺激，時(shí)間相同。第2天除重復(fù)進(jìn)行前一天實(shí)驗(yàn)并開(kāi)始給藥，連續(xù)給藥14 d。最后一次給藥后24 h，采用Open-Field法進(jìn)行動(dòng)物行為學(xué)敞箱實(shí)驗(yàn)及條件回避實(shí)驗(yàn)，記錄并統(tǒng)計(jì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。

2.3  針刺取穴及操作方法針刺組根據(jù)《實(shí)驗(yàn)針灸學(xué)》［6］大鼠穴位定位方法，選擇百會(huì)、內(nèi)關(guān)、神庭、三陰交穴，并參照人和動(dòng)物的穴位解剖結(jié)構(gòu)特點(diǎn)，在動(dòng)物針灸穴位圖譜的基礎(chǔ)上，于大鼠前正中線上，額頂骨縫交界線前方處定位神庭穴。其他穴位仿人取穴。針刺方法: 穴位常規(guī)消毒，百會(huì)穴向前斜刺，神庭穴向上斜刺，進(jìn)針深度約為0.2 cm。內(nèi)關(guān)直刺0.3 cm，三陰交直刺0.2 cm。每穴行均勻捻轉(zhuǎn)刺激30 s，留針10 min,每日治療1次,連續(xù)14 d。最后一次治療后24 h，采用Open-Field法進(jìn)行動(dòng)物行為學(xué)敞箱實(shí)驗(yàn)及條件回避實(shí)驗(yàn)，記錄并統(tǒng)計(jì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。

2.4  敞箱實(shí)驗(yàn)將各組大鼠依次放入自制敞箱，以動(dòng)物穿越底面塊數(shù)為水平運(yùn)動(dòng)（crossing）得分，直立次數(shù)為垂直運(yùn)動(dòng)（rearing）得分，記錄其水平運(yùn)動(dòng)、垂直運(yùn)動(dòng)次數(shù)，每只動(dòng)物測(cè)定1次，測(cè)定時(shí)間為3 min/次，記錄水平運(yùn)動(dòng)得分和垂直運(yùn)動(dòng)得分情況。

2.5  條件回避實(shí)驗(yàn)（conditioned  avoidance  testing）繼敞箱實(shí)驗(yàn)后，大鼠放入穿梭箱后適應(yīng)5 s，進(jìn)行鈴聲刺激，非條件刺激為足電休克0.8 mA，在鈴聲響起3 s后開(kāi)始方波輸出電刺激，當(dāng)動(dòng)物逃到安全室后停止鈴聲和刺激，如未能逃避時(shí)刺激達(dá)30 s時(shí)停止。1次/min，共進(jìn)行30次，刺激間隔為27 s。測(cè)定回避成功次數(shù)和逃避潛伏期。 動(dòng)物在鈴聲開(kāi)始3 s內(nèi)逃到安全室，記錄回避成功一次，逃避潛伏期為0；刺激后才逃避的，其潛伏期記錄是從刺激開(kāi)始到逃避完成的時(shí)間；到最后未能逃避的，則潛伏期為30 s。

2.6  統(tǒng)計(jì)學(xué)處理所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用 ±s表示，計(jì)量資料采用t檢驗(yàn)、q檢驗(yàn)進(jìn)行差異顯著性檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料采用四格表的確切概率法檢驗(yàn)。

3  結(jié)果

3.1  針刺對(duì)學(xué)習(xí)無(wú)助模型大鼠敞箱實(shí)驗(yàn)的影響

3.1.1  水平運(yùn)動(dòng)針刺組、多慮平組、空白組均優(yōu)于模型組。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1  對(duì)大鼠水平運(yùn)動(dòng)的影響（略）

為避免統(tǒng)計(jì)學(xué)上第2類(lèi)錯(cuò)誤，出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果，本組數(shù)據(jù)采用q檢驗(yàn)。結(jié)果見(jiàn)表2。

表2  q檢驗(yàn)結(jié)果（略）

由此可見(jiàn)，空白組與模型組有顯著性差異，說(shuō)明此造模方法成功；針刺組及多慮平組與模型組有顯著性差異，其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；而前兩組與空白組的差異及前兩組間的差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說(shuō)明針刺與多慮平均有改善抑郁模型大鼠水平運(yùn)動(dòng)狀態(tài)的作用，且二者作用相似。

3.1.2  垂直運(yùn)動(dòng)各處理因素對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物垂直運(yùn)動(dòng)的影響無(wú)顯著差異。結(jié)果見(jiàn)表3。

表3  對(duì)大鼠垂直運(yùn)動(dòng)的影響（略）

為避免統(tǒng)計(jì)學(xué)上第2類(lèi)錯(cuò)誤，出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果，本組數(shù)據(jù)采用q檢驗(yàn)。結(jié)果見(jiàn)表4。

表4  q檢驗(yàn)結(jié)果（略）

由此可見(jiàn)，各處理因素對(duì)大鼠的垂直運(yùn)動(dòng)的影響無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3.2  針刺對(duì)學(xué)習(xí)無(wú)助模型大鼠條件回避實(shí)驗(yàn)（conditioned  avoidance  testing）的影響

3.2.1  回避成功空白組、多慮平對(duì)照組、針刺組大鼠，回避成功次數(shù)較多。結(jié)果見(jiàn)表5。

表5  回避成功次數(shù)（略）

本組數(shù)據(jù)采用q檢驗(yàn)。結(jié)果見(jiàn)表6。

篇（6）

中圖分類(lèi)號(hào)：R743.34 文獻(xiàn)識(shí)別號(hào)：A

出血性腦卒中是原發(fā)于腦實(shí)質(zhì)內(nèi)的非外傷性出血，致殘及致死率高較高，該病嚴(yán)重危害著人類(lèi)的健康。對(duì)腦出血的實(shí)驗(yàn)研究一直受到廣泛重視，腦出血造模的穩(wěn)定性、同患者發(fā)病表現(xiàn)的接近性直接關(guān)系到實(shí)驗(yàn)研究的科學(xué)性和實(shí)用性。本實(shí)驗(yàn)研究通過(guò)鼠尾動(dòng)脈血分次回注自體大鼠腦組織內(nèi)，建立腦出血的大樹(shù)模型。

1資料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)儀器 腦立體定向儀 （日本）；100 μL微量注射器，渦輪牙鉆機(jī)；手術(shù)相關(guān)器械

1.2一般資料 近交成年雌性SD大鼠90只，體重（300±20）g。由河北醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，標(biāo)準(zhǔn)普通飼料喂養(yǎng)和自由飲水，晝夜自然節(jié)律，飼養(yǎng)環(huán)境為河北大學(xué)醫(yī)學(xué)部動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心多層層流架。

1.3方法 大鼠腦出血模型的制備：應(yīng)用10%水合氯醛對(duì)大鼠腹腔注射量為300 mg/Kg進(jìn)行麻醉，頭部備皮并應(yīng)用碘伏常規(guī)消毒后，俯臥位固定于定向儀上，前囟抬高1 mm，取長(zhǎng)度約為2 cm正中縱形切口，小型擴(kuò)皮器牽開(kāi)切口，取前囟點(diǎn)中線右側(cè)旁開(kāi)3.0 mm，沿矢狀面向后1.5 mm，牙鉆鉆透顱骨，深及骨膜。在消毒后在鼠尾腹側(cè)正中做一縱行切口，抽取尾動(dòng)脈不加抗凝劑的動(dòng)脈血液約60～70 μL。將針頭垂直于顱骨骨孔的方向，進(jìn)針約6 mm，緩慢注入50 μL自體動(dòng)脈血液，注血時(shí)間以兩分鐘為宜，為防止鼠血反流，將針留置10 min。緩慢退針，骨蠟封閉顱骨骨孔，縫合手術(shù)創(chuàng)口。

1.4行為學(xué)的分級(jí)評(píng)估 參照Longa 五級(jí)評(píng)分法[1]，對(duì)大鼠進(jìn)行神經(jīng)功能缺損評(píng)分：0級(jí)：無(wú)體征，記0分；Ⅰ級(jí)：動(dòng)物不能完全伸直其前肢，記1分；Ⅱ級(jí)：動(dòng)物一側(cè)肢體癱瘓，有追尾現(xiàn)象，記2分；Ⅲ級(jí)：動(dòng)物不能站立/ 打滾，記3分；Ⅳ級(jí)：無(wú)自發(fā)性活動(dòng)，有意識(shí)障礙，記4分。

2結(jié)果

大鼠實(shí)驗(yàn)?zāi)X出血造成后，進(jìn)行行為學(xué)評(píng)分，每只大鼠均采用Longa方法，反應(yīng)其行為學(xué)變化。根據(jù)對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的觀察，在大鼠大腦注射自體鼠尾動(dòng)脈血液后，動(dòng)物迅速出現(xiàn)行為和神經(jīng)功能異常，大鼠反應(yīng)遲鈍、皮毛無(wú)光澤、精神萎縮、進(jìn)食下降，對(duì)側(cè)肢體出現(xiàn)癱瘓，行走追尾，嚴(yán)重者動(dòng)物不能站立/打滾，個(gè)別大鼠呈現(xiàn)意識(shí)障礙，昏迷等表現(xiàn)，其功能異常程度與出血的嚴(yán)重程度相關(guān)。腦組織標(biāo)本可見(jiàn)明顯的血腫占位，結(jié)合對(duì)大鼠造模3 d后進(jìn)行行為學(xué)評(píng)分，評(píng)分2～3分得提示模型建立成功。評(píng)分1分的4只，2分的34只，3分46只，4分的6只。造模成功80只，成功率88.9%。

3討論

腦出血?jiǎng)游锬Ｐ偷闹苽涑蔀榱搜芯磕X血管病不可或缺的基礎(chǔ)，而好動(dòng)物腦出血模型是接近于人類(lèi)腦出血的血腫、水腫、缺血缺氧等病生理變化，符合疾病的發(fā)展規(guī)律的，并且動(dòng)物模型具有較好的穩(wěn)定性、可重復(fù)性。

動(dòng)物模型的應(yīng)用，使腦出血過(guò)程的神經(jīng)生物學(xué)基礎(chǔ)研究得到較大進(jìn)展。在過(guò)去幾十年里有很多方法造腦出血的動(dòng)物模型，用于模仿腦出血的發(fā)病機(jī)制，其原理各不相同，效果也不盡相同，模型的選擇至關(guān)重要。常用的方法有以下幾種：①膠原酶誘導(dǎo)腦出血模型，應(yīng)用膠原酶向腦組織中注入，膠原酶刺激破壞腦內(nèi)組織，破壞血管而滲血形成血腫[1]。②微球囊充脹腦出血模型，在大鼠大腦尾狀核包埋微小氣囊，充盈氣囊造模，產(chǎn)生占位效應(yīng)腦部傷害一致，可重復(fù)性好，但同顱內(nèi)血腫產(chǎn)生的其他病生理改變不同。③自發(fā)性腦出血模型，用遺傳方式篩選出自發(fā)性高血壓大鼠，待出現(xiàn)高血壓嚴(yán)重并發(fā)癥腦出血后提示造模成功，本模型能夠較準(zhǔn)確的模擬高血壓腦出血等病理生理變化，存在的問(wèn)題是獲得腦出血模型的時(shí)間不能把握，出血部位及大小各異，各模型間對(duì)比性差；④凝固自體動(dòng)脈血注入腦出血模型，抽取大鼠股動(dòng)脈血，靜置5 min待動(dòng)脈血凝固后后腦內(nèi)注射。此方式可控制鮮血沿針道返流問(wèn)題，但同時(shí)存在血液凝固后血腫在腦內(nèi)塑形困難[2]。⑤應(yīng)用立體定位技術(shù)取自體血注血腦出血模型，即本研究采用造模方法，新抽取鮮鼠尾動(dòng)脈血，應(yīng)用立體定位儀固定微量注射器，精確定位于尾狀核，穿刺并腦內(nèi)注血，注血量50 μL血相當(dāng)與人35 mL的血腫，應(yīng)用非肝素化自體動(dòng)脈血，更接近接近人類(lèi)自發(fā)性出血性卒中，適合研究腦出血病理生理特點(diǎn)，能夠觀察各種因子在血液凝固過(guò)程中對(duì)腦血流及腦組織細(xì)胞代謝的影響，本研究取SD大鼠腦內(nèi)最大的核團(tuán)--尾狀核，是高血壓腦出血最好發(fā)部位，對(duì)腦出血的研究提供可靠的依據(jù)[3]。

根據(jù)對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的觀察，其功能異常程度與病變嚴(yán)重程度一致。腦組織標(biāo)本在尾狀核部位可見(jiàn)明顯的血腫形成，提示模型建立成功，本組大鼠造模成功率88.9%，本造模方式是能夠較好的模擬腦出血的病理生理的改變，應(yīng)用此方法保證了在對(duì)腦出血的研究過(guò)程中確保實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的真實(shí)性和可靠性。

參考文獻(xiàn)：

篇（7）

目的對(duì)比研究改工藝后消栓通絡(luò)片與市售消栓通絡(luò)片對(duì)大鼠局灶性腦缺血的治療作用差異。方法采用頸內(nèi)動(dòng)脈插入尼龍線栓的方法建立大鼠左側(cè)大腦中動(dòng)脈栓塞模型。觀察給藥后各組大鼠行為學(xué)評(píng)分、測(cè)定腦梗死面積及血清超氧化物歧化酶（SOD）、NFκB、caspase3含量的差異。結(jié)果改工藝后的消栓通絡(luò)片高、中劑量組均能有效緩解4h，24h時(shí)MCAO引起的行為學(xué)病變，降低行為學(xué)評(píng)分；高、中、低劑量組均能升高M(jìn)CAO引起的SOD降低；高、低劑量組能明顯降低MCAO引起的血清NFκB的升高；中、低劑量組對(duì)MCAO引起的Caspase3的顯著升高有一定抑制作用。與市售消栓通絡(luò)片比較，改工藝消栓通絡(luò)片從大鼠行為學(xué)評(píng)分的降低，血清SOD活性的增加，血清Caspase3、NFκB的表達(dá)效果均有優(yōu)于市售消栓通絡(luò)片的趨勢(shì)。結(jié)論改工藝消栓通絡(luò)片各劑量組對(duì)腦缺血進(jìn)展期大鼠均有一定的恢復(fù)作用，其藥效略優(yōu)于市售消栓通絡(luò)片。

關(guān)鍵詞：

中藥工藝改進(jìn)；黃芪；三七；槐花；丹參；缺氧缺血，腦；大鼠

消栓通絡(luò)片是治療中風(fēng)恢復(fù)期的有效驗(yàn)方，有活血化瘀，溫經(jīng)通絡(luò)的作用。臨床常用于腦血栓引起的半身不遂，肢體麻木的治療。我們對(duì)該方的傳統(tǒng)制劑工藝進(jìn)行了改進(jìn)，將黃芪、三七、槐花、丹參四味藥材由原工藝的水提改為60％醇提。制劑改進(jìn)后規(guī)格由原來(lái)的1．8g生藥／片可增加為2．5g生藥／片，服藥量將明顯減少，增加病患用藥依從性。本實(shí)驗(yàn)采用MCAO法制作大鼠腦缺血再灌注模型對(duì)比觀察改工藝后消栓通絡(luò)片與市售消栓通絡(luò)片對(duì)大鼠局灶性腦缺血的治療作用差異及其作用機(jī)制。

1實(shí)驗(yàn)材料

1．1藥物與試劑

1．1．1供試品

改工藝消栓通絡(luò)片浸膏粉由康緣現(xiàn)代中藥研究院提供，規(guī)格：12．27g生藥／g提取物，批號(hào)130926。供試品制備方法：將川芎、桂枝、木香、山楂、澤瀉、郁金六味藥材水煎，合并煎液，濾過(guò)、濃縮，加乙醇調(diào)至70％，靜置，取上清液濃縮、干燥。黃芪、三七、槐花、丹參四味藥材60％醇提，合并醇提液，濾過(guò)。大孔樹(shù)脂純化，濃縮，干燥。將兩次所得干浸膏粉碎，加入適量輔料，混勻，加入冰片，混勻，制成顆粒，干燥，壓制成片，包衣，制成2．5g生藥／片的藥物。

1．1．2對(duì)照藥

依達(dá)拉奉注射液：20mL：30g，2支裝，吉林省輝南長(zhǎng)龍生化藥業(yè)股份有限公司，批號(hào)2013051002；消栓通絡(luò)片（市售）：1．8g生藥／片，某公司，批號(hào)：130301。

1．1．3試劑

水合氯醛，批號(hào)：20130426；羧甲基纖維素鈉，批號(hào)：20120330；磷酸氫二鈉，批號(hào)：20131125，均為國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司試劑。氯化鈉，南京化學(xué)試劑有限公司，核因子κB放免藥盒，批號(hào)：20140401；活化半胱氨酸蛋白酶蛋白3放免試劑盒，批號(hào)：20140410；超氧化物歧化酶檢測(cè)試劑盒，批號(hào)：20140101，均為北京華英生物技術(shù)研究所試劑。

1．2主要儀器

電子天平，賽多利斯科學(xué)儀器（北京）有限公司；CENTRFUGE5840型冷凍離心機(jī)，Eppendorf；DKS26恒溫水浴鍋，上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司；DHG9076A電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱，上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司。

1．3實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

SD大鼠，雄性，體重280～330g，SPF（無(wú)特定病原體）級(jí)，上海西普爾－必凱實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司，許可證號(hào)碼：SCXK（滬）2013－0016。

2實(shí)驗(yàn)方法

2．1動(dòng)物分組

取體重280～330g的雄性大鼠，隨機(jī)分為7組。分組如下：假手術(shù)組（等容積5‰CMC－Na）、模型組（等容積5‰CMC－Na）、陽(yáng)性藥依達(dá)拉奉組（1．13mg•kg－1大鼠）、市售消栓通絡(luò)片組（2．7g生藥•kg－1大鼠）、消栓通絡(luò)片高劑量組（0．44g提取物•kg－1大鼠）、消栓通絡(luò)片中劑量組（0．22g提取物•kg－1大鼠）、消栓通絡(luò)片低劑量組（0．11g提取物•kg－1大鼠）陽(yáng)性藥腹腔注射給藥，1．13mg•kg－1大鼠，其它各給藥組大鼠于術(shù)前0．5h灌胃給藥1次，10mL•kg－1大鼠。1次／d，連續(xù)3日，假手術(shù)組、模型組給予等容積5‰CMC－Na溶液。

2．2造模方法

采用頸內(nèi)動(dòng)脈線栓法復(fù)制左側(cè)大腦中動(dòng)脈栓塞（MCAO）模型。參照文獻(xiàn)方法加以改進(jìn)［1］，分離出頸總動(dòng)脈，繼續(xù)向下分離并結(jié)扎頸外動(dòng)脈，分離出頸內(nèi)動(dòng)脈，在ECA距ICA2mm處剪一小口，將一尼龍栓子插入ECA并進(jìn)入CCA，輕扎備線，防止出血。剪斷ECA，松開(kāi)ICA的動(dòng)脈夾，牽引ECA，使其進(jìn)入ICA，繼續(xù)向下推進(jìn)直至尼龍線插入深度約為18mm停止。此時(shí)松開(kāi)CCA動(dòng)脈夾，扎緊備線，外留1cm長(zhǎng)線頭，縫合皮膚，回籠飼養(yǎng)。于缺血2h后再灌注，再灌注時(shí)輕拉尼龍線，使尼龍線拔出ICA，進(jìn)入ECA殘端，血流再通，修剪尼龍線栓尾部，回籠自然喂養(yǎng)。

2．3評(píng)價(jià)指標(biāo)

2．3．1對(duì)大鼠神經(jīng)行為學(xué)的影響［1］見(jiàn)表1。

2．3．2對(duì)缺血梗死面積的影響

［2］TTC染色：大鼠于造模后72h取腦，去除嗅球、小腦和低位腦干，置－20℃冰箱冰凍20min，沿冠狀面切成5片，每片約2mm，置5mL含有1％TTC的磷酸緩沖溶液中避光溫孵10min染色，4～5min翻動(dòng)一次。經(jīng)染色后，正常腦組織呈玫瑰紅色，而梗死組織呈白色。用圖象測(cè)量軟件Imagepro－Plus分析腦片面積，分別計(jì)算出5個(gè)腦片共10個(gè)面的總面積和梗死區(qū)域的面積，求出梗死區(qū)面積占總面積的百分比，即梗死率。

2．3．3對(duì)血清超氧化物歧化酶（SOD）

NFκB、caspase3含量的影響造模后72h，于最后一次給藥后0．5h，麻醉大鼠，勁總動(dòng)脈插管取血，3000r•min－1離心10min，分離血清，用生化法檢測(cè)血清SOD活性，用放免法檢測(cè)血清NFκB、caspase3含量。

2．4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

應(yīng)用SPSS13．0數(shù)理統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行相關(guān)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析，實(shí)驗(yàn)的計(jì)量數(shù)據(jù)資料采用x±s表示，各組間的比較采用t檢驗(yàn)。當(dāng)P＜0．05時(shí)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3．1消栓通絡(luò)片與市售消栓通絡(luò)片對(duì)缺血性腦損傷模型大鼠行為學(xué)評(píng)分及梗塞率的影響

腦缺血后4h，各給藥組行為學(xué)評(píng)分均有降低，與模型組相比，依達(dá)拉奉組、消栓通絡(luò)片高、中劑量組行為學(xué)評(píng)分均下降（P＜0．01）。其余各組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0．05）。24h，市售消栓通絡(luò)組和消栓通絡(luò)片高中劑量組大鼠行為學(xué)評(píng)分下降明顯，與模型組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0．05），其余各給藥組分值也有下降，但與模型組相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0．05）。造模后72h，大鼠腦梗死明顯（P＜0．01），除改工藝低劑量組，其余各給藥組大鼠腦梗塞率均有下降，依達(dá)拉奉組下降明顯，與模型組相比差異有顯著性（P＜0．01）。結(jié)果見(jiàn)表2。

3．2消栓通絡(luò)片與市售消栓通絡(luò)片對(duì)血清超氧化物歧化酶SOD、NFκB、caspase－3含量的影響

造模后72h，大鼠血清NFκB的含量較假手術(shù)組增高（P＜0．05），給予消栓通絡(luò)片高、低劑量后，能明顯降低大鼠血清NFκB含量（P＜0．05），其余各組血清NFκB含量與模型組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0．05）。大鼠血清caspase3含量較假手術(shù)組增高（P＜0．05），給予消栓通絡(luò)片中、高劑量后，能明顯降低大鼠血清caspase3含量（P＜0．01），其余各組血清caspase3含量與模型組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0．05）。各組大鼠血清SOD含量在給予市售消栓通絡(luò)片和消栓通絡(luò)片各劑量組后與模型組比較均有明顯上升（P＞0．01）。結(jié)果見(jiàn)表3。

4討論

消栓通絡(luò)片由川芎、丹參、黃芪、澤瀉、三七、槐花、桂枝、郁金、木香、冰片、山楂十一味中藥組成，君藥川芎、丹參、郁金中含有水溶性酚酸類(lèi)化合物［3～4］，其中原兒茶醛和咖啡酸具有廣泛的抑菌、抗病毒、擴(kuò)張心腦血管、抗血小板凝集作用，原兒茶醛等有強(qiáng)烈的清除氧自由基作用。還含有人參皂苷Rg1、Rb1、三七皂苷R1、黃芪甲苷、丹參酮等。脂溶性成分蘆丁［5］屬于黃酮類(lèi)化合物，有明顯的擴(kuò)張冠脈的作用，還有抗炎、抗菌、抗病毒等作用，可用于治療毛細(xì)血管脆性引起的出血癥等。該方傳統(tǒng)制劑工藝中黃芪、三七、槐花、丹參四味藥材為水提，我們將水提工藝改為用60％醇提。制劑改進(jìn)后每片含藥量明顯增加，服藥量明顯減少，增加病患用藥依從性：

我們根據(jù)文獻(xiàn)的方法加以改進(jìn)，采用MCAO的方法復(fù)制中動(dòng)脈阻塞的腦缺血模型，觀察改工藝后消栓通絡(luò)片與市售消栓通絡(luò)片對(duì)大鼠局灶性腦缺血的治療作用差異及其作用機(jī)制。造模后72h，我們觀察到大鼠腦梗塞率達(dá)到20．64％±4．5％，且手術(shù)大鼠出現(xiàn)了明顯的神經(jīng)行為學(xué)障礙，和文獻(xiàn)報(bào)道相符［6～7］，說(shuō)明模型復(fù)制成功。給予依達(dá)拉奉后，在急性期4h，很好緩解MCAO引起的行為學(xué)病變，降低行為學(xué)評(píng)分。給予消栓通絡(luò)片與市售消栓通絡(luò)片后發(fā)現(xiàn)，市售消栓通絡(luò)片能很好緩解急性期24h時(shí)MCAO引起的行為學(xué)病變，降低行為學(xué)評(píng)分。消栓通絡(luò)片高、中劑量組能有效緩解4h、24h時(shí)MCAO引起的行為學(xué)病變，降低行為學(xué)評(píng)分。

Caspase家族在缺血性腦損傷中發(fā)揮重要作用，其中Caspase－3是Caspase級(jí)聯(lián)反應(yīng)中下游最關(guān)鍵的凋亡蛋白酶，在各種因素啟動(dòng)的凋亡程序中起最后的樞紐作用。消栓通絡(luò)片高、中劑量組能明顯降低MCAO引起的血清Caspase－3的升高，緩解腦缺血進(jìn)展期細(xì)胞凋亡的持續(xù)發(fā)生，從而達(dá)到腦保護(hù)的作用［8～10］。NFκB是細(xì)胞內(nèi)最重要的活性蛋白轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子，它調(diào)控大量基因的轉(zhuǎn)錄，包括細(xì)胞因子、生長(zhǎng)因子、趨化因子、黏附因子、凋亡調(diào)控因子、炎癥通路蛋白、細(xì)胞應(yīng)激蛋白等。大量炎性蛋白質(zhì)的表達(dá)對(duì)細(xì)胞損傷和修復(fù)過(guò)程至關(guān)重要［11－14］。消栓通絡(luò)片中、低劑量組對(duì)MCAO引起的NFκB的明顯升高有一定抑制作用，從而緩解MCAO后的炎癥反應(yīng)及細(xì)胞凋亡的持續(xù)發(fā)展，達(dá)到腦保護(hù)作用。

超氧化物歧化酶（簡(jiǎn)稱(chēng)SOD）是清除生物體內(nèi)超氧陰離子自由基的一種重要抗氧化酶［2，15］，它能降低氧化應(yīng)激對(duì)腦組織產(chǎn)生的損傷。造模后72h，在給予改工藝消栓通絡(luò)片后SOD均有明顯上升，提示改工藝消栓通絡(luò)片各劑量組均有良好的抑制腦缺血后氧化應(yīng)激的作用。

以上結(jié)果提示，改工藝后消栓通絡(luò)片各劑量組對(duì)腦缺血恢復(fù)期大鼠均有一定的緩解作用。改工藝消栓通絡(luò)片高劑量組在4h，減輕行為學(xué)評(píng)分的作用有優(yōu)于市售消栓通絡(luò)片的趨勢(shì)，消栓通絡(luò)片高劑量組對(duì)MCAO后大鼠血清Caspase3、NFκB的表達(dá)均有一定的抑制作用，效果有優(yōu)于市售消栓通絡(luò)片的趨勢(shì)。其保護(hù)作用的發(fā)揮可能依賴(lài)于對(duì)炎癥及神經(jīng)細(xì)胞凋亡的雙重抑制作用。依達(dá)拉奉對(duì)MCAO后72h大鼠腦梗塞率有明顯的減小，說(shuō)明其有較好抗腦缺血作用，而對(duì)72h時(shí)大鼠血清SOD活性、Caspase3、NFκB的表達(dá)無(wú)明顯影響，推測(cè)其在72h時(shí)，對(duì)血清這三個(gè)因子影響較小，此時(shí)間點(diǎn)依達(dá)拉奉并不主要通過(guò)影響這三個(gè)因子的表達(dá)發(fā)揮抗腦缺血的作用。

參考文獻(xiàn)：

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篇（8）

【關(guān)鍵詞】 抑郁癥　定志小丸　雌二醇　神經(jīng)干細(xì)胞　皮質(zhì)醇　大鼠

Abstract：Objective To study the anti-depression mechanism of Dingzhixiaowan concerning on histology of hippocampal formation. Methods 40 female rats were pided into control， depression model group (model group)， distilled water group (DW group) and Dingzhixiaowan group (Chinese herb group). Behavior points were measured by open field method. Serum concentrations of cortisol and estradiol (E2) were checked with ELISA. HE staining and electron microscopy were applied to observe the histology of neurons in hippocampal formation. Immunohistochemistry method was employed to detect Nestin expression. Results Compared with the control， behavior points， serum E2 level and Nestin expression decreased obviously and serum cortisol level increased markedly， CA3 neurons were seriously damaged in model and DW groups. While behavior points， serum E2 level did not change， Nestin expression increased obviously and serum cortisol level decreased markedly， CA3 neurons were basically normal in Chinese herb groups. Conclusion Dingzhixiaowan can protect hippocampal formation， which might be one of the anti-depression mechnisms.

Key words：depression；Dingzhixiaowan；estradiol；neural stem cell；cortisol；rat

目前認(rèn)為，慢性應(yīng)激刺激造成的海馬結(jié)構(gòu)損傷是抑郁癥發(fā)病的主要原因。對(duì)海馬結(jié)構(gòu)來(lái)說(shuō)，糖皮質(zhì)激素是損傷激素，雌激素為保護(hù)激素，而女性的雌激素水平變化較大，其保護(hù)作用時(shí)常減弱，這可能是女性抑郁癥發(fā)病率較高的原因。本研究以此為出發(fā)點(diǎn)，研究定志小丸的抗抑郁機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物及分組

成年Wistar雌性大鼠(230±20)g，遼寧中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供，合格證號(hào)：SCXK(遼)2004-0018。適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后，選擇體重和行為學(xué)得分相近的40只大鼠，隨機(jī)分為對(duì)照組、模型組、蒸餾水組(DW組)和定志小丸組(中藥組)，每組10只。對(duì)照組每籠5只飼養(yǎng)，其余3組每籠1只飼養(yǎng)。

1.2 抑郁癥模型的建立

除對(duì)照組外，其余3組動(dòng)物均接受慢性應(yīng)激刺激，復(fù)制慢性不可預(yù)見(jiàn)性應(yīng)激模型。其方法是：在21 d內(nèi)施加電擊足底(36 V交流電，5 min)、冰水游泳(4 ℃，5 min)、搖晃(1 min)、夾尾(1 min)、禁水(24 h)、禁食(24 h)等刺激，每種刺激3～4次。

1.3 給藥

對(duì)照組不給藥；模型組只施加灌胃動(dòng)作；DW組灌服1 mL蒸餾水；中藥組灌服定志小丸。定志小丸為人參、茯苓、遠(yuǎn)志、石菖蒲的標(biāo)準(zhǔn)提取物(購(gòu)于安徽宣城百草生物有限公司，提純比例為5∶1)，劑量分別是10、10、6、6 g，溶于適量水中，加熱后濃縮為1 kg/L。按成人用量折算成灌胃劑量[1 mL/100(g? d)]，于刺激前1 h灌服。

1.4 大鼠行為學(xué)檢測(cè)

采用Open field法檢測(cè)，以3 min內(nèi)大鼠水平穿越方格數(shù)作為水平活動(dòng)得分，以前肢抬起次數(shù)為垂直活動(dòng)得分。檢測(cè)過(guò)程中保證時(shí)間、光照、溫度及環(huán)境噪音的一致性。檢測(cè)由3人同時(shí)完成，1人負(fù)責(zé)計(jì)時(shí)，1人負(fù)責(zé)觀察大鼠的水平活動(dòng)，1人負(fù)責(zé)計(jì)數(shù)垂直活動(dòng)。正式檢測(cè)前，3人首先熟悉檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)，并進(jìn)行多次訓(xùn)練，盡量減少人為誤差。

1.5 血清皮質(zhì)醇和雌二醇檢測(cè)

在第22天，大鼠腹腔注射20%氨基甲酸乙酯(0.4 mL/100 g)麻醉后，腹主動(dòng)脈取血，離心后取血清，凍存?zhèn)溆谩Ｓ诳傖t(yī)院內(nèi)分泌實(shí)驗(yàn)室采用ELISA方法檢測(cè)血清皮質(zhì)醇和雌二醇(E2)含量。

1.6 海馬組織學(xué)觀察

將取血后的大鼠用150 mL生理鹽水經(jīng)主動(dòng)脈快速?zèng)_洗，取一側(cè)海馬行常規(guī)HE染色，另一側(cè)于掃描電鏡下觀察形態(tài)學(xué)變化。

1.7 齒狀回神經(jīng)干細(xì)胞(NSC)增殖檢測(cè)

采用Nestin免疫組化方法，取經(jīng)生理鹽水快速?zèng)_洗后的海馬，4%多聚甲醛固定4～6 h，30%蔗糖溶液沉底。冰凍連續(xù)切片，片厚25 μm，隔4片取1片。將切片置含新鮮0.5% H2O2的純甲醇中30 min；0.1% Triton溶液中30 min；正常山羊血清60 min；兔抗鼠Nestin一抗(1∶2000，Sigma)，25 ℃孵育1 h，4 ℃過(guò)夜；生物素化山羊抗兔IgG(博士德二抗試劑盒)，室溫下60 min；SABC復(fù)合物，室溫60 min；DAB顯色(博士德)。染色對(duì)照：用正常山羊血清和PBS代替Nestin一抗作孵育，其余步驟同上。利用BI-2000醫(yī)學(xué)圖像分析系統(tǒng)，計(jì)數(shù)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)。

1.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以x±s表示，采用SPSS11.5進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理。

2 結(jié)果

2.1 各組大鼠海馬CA3區(qū)神經(jīng)元的形態(tài)學(xué)變化

光鏡下可見(jiàn)，對(duì)照組CA3區(qū)有大量致密錐體細(xì)胞，排列整齊，細(xì)胞完整，邊緣清晰，死亡細(xì)胞較少；模型組和DW組可見(jiàn)細(xì)胞層次減少、紊亂、中斷，大量細(xì)胞壞死；中藥組神經(jīng)元形態(tài)與對(duì)照組基本接近。電鏡下可見(jiàn)，對(duì)照組細(xì)胞器豐富，輪廓清晰，細(xì)胞核呈圓形，核膜清晰光滑完整，核染色質(zhì)分布均勻；模型組和DW組細(xì)胞器減少，線粒體空泡化，細(xì)胞核變小，不規(guī)則，且核膜增厚，核周電子密度降低；中藥組與對(duì)照組基本相同。

2.2 各組大鼠齒狀回Nestin表達(dá)

鏡下可見(jiàn)Nestin免疫陽(yáng)性反應(yīng)產(chǎn)物呈棕黃色，環(huán)形分布于核膜周?chē)?duì)照組鏡下可見(jiàn)較多的棕黃色反應(yīng)物，邊緣相對(duì)清晰，細(xì)胞大小相近；模型組和DW組棕黃色反應(yīng)物較少，邊緣不清，細(xì)胞大小不一致；中藥組鏡下可見(jiàn)大量棕黃色反應(yīng)物，邊緣清晰，細(xì)胞大小一致。各組Nestin陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)見(jiàn)表1。表1 各組大鼠Nestin陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)(略)注：與對(duì)照組比較，*P

2.3 各組大鼠行為學(xué)得分

(見(jiàn)表2)表2 各組大鼠的行為學(xué)得分(略)注：與本組第0天比較，P

2.4 各組大鼠血清皮質(zhì)醇和雌二醇含量

(見(jiàn)表3)表3 各組大鼠血清皮質(zhì)醇和雌二醇含量變化(略)

3 討論

海馬結(jié)構(gòu)具有調(diào)節(jié)內(nèi)臟功能、情緒和行為的多種作用，主要由海馬和齒狀回組成。齒狀回存在NSC，能夠增殖、遷移至海馬CA3區(qū)，分化形成新的神經(jīng)細(xì)胞。因?yàn)橐种讫X狀回NSC增殖后，許多抗抑郁藥物會(huì)失效，所以，海馬CA3與齒狀回的關(guān)系在抑郁癥發(fā)病中的作用逐漸受到重視。抑郁癥的發(fā)病機(jī)制目前認(rèn)為是慢性應(yīng)激刺激引起腎上腺皮質(zhì)過(guò)度分泌糖皮質(zhì)激素，繼而損傷海馬神經(jīng)元。本實(shí)驗(yàn)也觀察到同樣現(xiàn)象。由于高水平的糖皮質(zhì)激素還能抑制齒狀回NSC增殖，從而降低了海馬結(jié)構(gòu)的自我修復(fù)能力[1]，繼而導(dǎo)致海馬結(jié)構(gòu)出現(xiàn)不可逆損傷。因此，抑郁癥的根治應(yīng)圍繞保護(hù)海馬成熟神經(jīng)元和齒狀回NSC兩方面進(jìn)行。

篇（9）

抽動(dòng)—穢語(yǔ)綜合征(tourette syndrome，ts)，又稱(chēng)多發(fā)性抽動(dòng)癥，是一種兒童期發(fā)病的慢性神經(jīng)精神障礙性疾病。wWW.133229.cOM臨床表現(xiàn)主要為突然、快速、反復(fù)、非節(jié)律性、不自主和刻板的運(yùn)動(dòng)性抽動(dòng)和發(fā)聲性抽動(dòng)，還可能伴有各種行為紊亂、強(qiáng)迫觀念與行為、認(rèn)知障礙等，可不同程度地干擾和損害兒童的認(rèn)知功能，影響社會(huì)適應(yīng)能力。本病病因尚未明確，具有明顯的遺傳傾向，多見(jiàn)于4～12歲的兒童，患病率約為005%～3%，近年來(lái)發(fā)病呈明顯上升趨勢(shì)，男孩多于女孩[1]。廣東省中醫(yī)院兒科在臨床實(shí)踐中運(yùn)用自擬方益智寧神口服液治療該病，取得了較好的療效[2]。本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用亞氨基二丙腈腹腔注射建立抽動(dòng)—穢語(yǔ)綜合征模型大鼠，觀察該藥對(duì)模型大鼠行為學(xué)和神經(jīng)生物學(xué)的影響，現(xiàn)報(bào)道如下。

1材料與方法

11實(shí)驗(yàn)動(dòng)物spf級(jí)sd大鼠60只，28～30d齡，體質(zhì)量(250±10)g，雌雄各半。由廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供(許可證號(hào):粵監(jiān)證字2008d006，批號(hào)：0037766)。

12實(shí)驗(yàn)藥品亞氨基二丙腈(iminodipropionitrile，idpn)購(gòu)自alfa aesar公司(批號(hào)：c7323a)，中藥益智寧神口服液(由廣東省中醫(yī)院提供，批號(hào)：080201)，對(duì)照藥物為氟哌啶醇(上海信誼九福藥業(yè)有限公司，批號(hào)：08031121)。

13儀器及試劑lc26a 型高效液相色譜儀、spd26av 熒光檢測(cè)器、c2r4a 數(shù)據(jù)處理機(jī)均為日本島津公司產(chǎn)品，脫水機(jī)、包埋機(jī)、切片機(jī)和生物顯微鏡等設(shè)備為德國(guó)leica公司產(chǎn)品，微量組織勻漿器為millipore公司產(chǎn)品，zh藍(lán)星c/s型腦立體定位儀，高氯酸、乙二胺四乙酸二鈉(edtana2)均為分析純，甲醇為色譜純，對(duì)照品由中國(guó)藥品生物制品所提供。

14模型復(fù)制參考wakata[3]的方法，將亞氨基二丙腈溶解于生理鹽水，稀釋成濃度100mg/ml，給藥途徑為腹腔注射，劑量為150mg·kg-1·d-1，每天1次，共用7d。

15分組及給藥選用sd大鼠隨機(jī)分為4組：空白組和模型組各10只，中藥組和西藥組各20只，每組均雌雄各半。治療組在造模后第2天開(kāi)始給藥，中藥組按20kg的兒童每天口服20ml益智寧神口服液的比例計(jì)算，每只大鼠灌胃約2ml/d;西藥組按20kg的兒童每天口服氟哌啶醇片1mg的比例計(jì)算，每只大鼠灌胃約015mg/d，連續(xù)14d。

16大鼠行為觀察[4]采用觀察評(píng)分，每次至少觀察1h，主要誘發(fā)癥狀為運(yùn)動(dòng)行為和刻板運(yùn)動(dòng)。(1)運(yùn)動(dòng)行為評(píng)分：0分：安靜或正常活動(dòng);1分：能過(guò)度興奮;2分：探究行為增加;3分：跑;4分：跑和跳;(2)刻板運(yùn)動(dòng)(或定型運(yùn)動(dòng))評(píng)分：0分：無(wú)刻板運(yùn)動(dòng);1分：旋轉(zhuǎn)行為;2分：頭和頸部的上下運(yùn)動(dòng)過(guò)多;3分：頭、頸部的上下運(yùn)動(dòng)過(guò)多加旋轉(zhuǎn)行為;4分：頭向側(cè)擺合并頭和頸部的上下運(yùn)動(dòng)過(guò)多。

17神經(jīng)遞質(zhì)水平檢測(cè)[5]第14天將所有實(shí)驗(yàn)大鼠迅速斷頭處死，借助腦立體定位儀，取右腦海馬組織及邊緣系統(tǒng)(包括紋狀體、隔核、層殼核、基底節(jié)、齒狀回)，精確稱(chēng)質(zhì)量，置入1ml處理液(含01mol/l高氯酸和05g/ledtana2)中，微量組織勻漿器冰溶下勻漿，4℃冰凍離心10000r/min，取上清液置入-20℃保存。采用高效液相色譜法測(cè)定多巴胺(da)和去甲腎上腺素(ne)濃度。測(cè)樣時(shí)，室溫下解凍，進(jìn)樣20μl，以峰面積外標(biāo)法定量。

18統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用spss130和sas913版本進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理和分析，各組神經(jīng)遞質(zhì)水平檢測(cè)數(shù)據(jù)分別進(jìn)行方差齊性和正態(tài)分布檢驗(yàn)，方差不齊采用秩和檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水平α=005。

2結(jié)果

21各組行為學(xué)觀察和評(píng)分各組治療前后運(yùn)動(dòng)行為和刻板運(yùn)動(dòng)積分見(jiàn)表1。模型組行為學(xué)評(píng)分與空白組比較，差異有顯著性意義(p<001)，表明造模是成功的。

治療14d后，中、西藥組運(yùn)動(dòng)行為積分和刻板運(yùn)動(dòng)積分降低，與模型組比較差異有顯著性意義(p<005或p<001)，表明中藥組和西藥組對(duì)動(dòng)物行為均有明顯改善作用，中藥組效果與西藥組相仿。

22各組治療前后腦組織da、ne含量變化比較表2結(jié)果顯示：模型組腦組織da水平降低，ne水平升高，與空白組比較差異均有顯著性意義(p<001);治療14d后，中、西藥組均可顯著升高da水平，降低ne水平，與模型組比較差異均有顯著性意義(p<005或p<001)，中藥組作用與西藥組相仿。表1各組治療前后運(yùn)動(dòng)行為和刻板運(yùn)動(dòng)積分比較(x±s)　表2各組治療前后神經(jīng)遞質(zhì)水平比較

3討論

idpn是一種中樞神經(jīng)毒素，50年代以后就用于神經(jīng)病理學(xué)的研究，本研究參考wakata[3]的方法復(fù)制模型，從神經(jīng)生物學(xué)和行為學(xué)兩方面觀察藥物治療對(duì)ts模型動(dòng)物臨床行為學(xué)典型特征的影響。idpn誘發(fā)ts模型大鼠出現(xiàn)明顯刻板運(yùn)動(dòng)和運(yùn)動(dòng)行為異常，如過(guò)度興奮、探究行為、異常跑跳、旋轉(zhuǎn)行為和頭頸部上下側(cè)擺等動(dòng)作均具有ts臨床行為學(xué)的典型特征，有時(shí)出現(xiàn)連續(xù)的嗤鼻、抬舉上肢等動(dòng)作，類(lèi)似于人類(lèi)ts患兒喉部發(fā)聲、聳肩等特征行為。本研究通過(guò)對(duì)藥物治療前后ts模型大鼠運(yùn)動(dòng)行為和刻板運(yùn)動(dòng)行為評(píng)分的比較，發(fā)現(xiàn)中藥組在改善動(dòng)物ts典型特征行為方面效果明顯，如頭部、頸部的抽動(dòng)減輕，旋轉(zhuǎn)行為明顯緩解，每次異常行為發(fā)作持續(xù)時(shí)間縮短，異常抽動(dòng)次數(shù)消失，異常跑動(dòng)及不規(guī)律的彈跳運(yùn)動(dòng)明顯減少。

雖然目前對(duì)ts的神經(jīng)生物學(xué)物質(zhì)基礎(chǔ)還未完全闡明，但基本認(rèn)為中樞神經(jīng)遞質(zhì)，特別是da、ne、5-羥色胺(5ht)等與ts之間關(guān)系密切[5]，因此，探討大腦多巴胺類(lèi)神經(jīng)遞質(zhì)及其代謝產(chǎn)物的水平是證明藥物神經(jīng)生物學(xué)療效的主要依據(jù)。本研究對(duì)大腦海馬區(qū)da和ne水平進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果表明：治療后中藥組da水平明顯升高，而ne水平有所下降，均趨向于正常水平。與ts有關(guān)的神經(jīng)遞質(zhì)包括乙酰膽堿、腎上腺素、5ht、多巴胺等，主要分布于紋狀體、隔區(qū)、藍(lán)斑、黑質(zhì)等海馬、基底前腦及邊緣系統(tǒng)，構(gòu)成復(fù)雜的神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)[6-8]。有關(guān)藥物治療對(duì)大腦組織不同部位和核團(tuán)神經(jīng)遞質(zhì)水平的影響文獻(xiàn)報(bào)道并不一致，而且與檢測(cè)時(shí)間點(diǎn)有很大關(guān)系[8]。本研究結(jié)果初步表明，中藥治療14d后，對(duì)大腦組織da和ne兩種神經(jīng)遞質(zhì)水平的變化產(chǎn)生顯著影響，對(duì)于治療過(guò)程中以及停藥后神經(jīng)遞質(zhì)的動(dòng)態(tài)變化仍需進(jìn)一步觀察。

益智寧神口服液的主要組成為：熟地黃、黃芪、白芍、龍骨、遠(yuǎn)志、石菖蒲、五味子。其中熟地，其味甘，性微溫，入心、肝、腎經(jīng)，本品味厚氣薄，為補(bǔ)血生精、滋陰補(bǔ)腎之要藥，《珍珠囊》曰：“主補(bǔ)血?dú)猓棠I水，益真陰”。黃芪，味甘，性微溫，入脾、肺經(jīng)，質(zhì)輕升浮，為升陽(yáng)補(bǔ)氣之圣藥。可補(bǔ)中氣、益元?dú)狻厝埂哑㈥?yáng)，選以補(bǔ)脾益氣。白芍味苦、酸，性微寒，入肝經(jīng)，既能養(yǎng)血斂陰，又能平抑肝陽(yáng)，還能柔肝止痙;而龍骨味甘、澀，性微寒，入心、肝經(jīng)，專(zhuān)攻平肝潛陽(yáng)、鎮(zhèn)靜安神之用，兩者搭配，養(yǎng)陰寧心，平肝潛陽(yáng)。五味子性溫，五味具備，酸能收斂，苦能清熱，咸能滋腎，溫而不燥，既能益氣生津，補(bǔ)腎養(yǎng)心，用其養(yǎng)心滋腎安神;遠(yuǎn)志、石菖蒲有安神益智、化痰開(kāi)竅之功效。諸藥配伍，具有健脾滋腎、平肝熄風(fēng)、寧神益智、化痰開(kāi)竅之功效。氟哌啶醇是目前治療ts的最有效藥物之一[9]，療效確切，但因副作用明顯使其臨床應(yīng)用受到限制，通過(guò)實(shí)驗(yàn)結(jié)合臨床用藥發(fā)現(xiàn)，益智寧神口服液的療效與氟哌啶醇無(wú)明顯差異，且療效更加穩(wěn)定，易為患兒及家屬接受。

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篇（10）

臨床研究表明，生命早期應(yīng)激容易導(dǎo)致個(gè)體成年后患精神疾病的傾向。例如，幼年時(shí)有受虐待經(jīng)歷成年后易出現(xiàn)心境障礙或者易患創(chuàng)傷后應(yīng)激障礙(post-traumatic stress disorder,PTSD)［1］。Brewin 等［2］研究證明少年時(shí)期的精神創(chuàng)傷和受虐待是形成PTSD重要的的危險(xiǎn)因素。母嬰分離被認(rèn)為是研究人在幼年時(shí)期被忽視和受虐待有效的動(dòng)物模型。大量相關(guān)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，母嬰分離能導(dǎo)致行為學(xué)和神經(jīng)內(nèi)分泌的異常而出現(xiàn)抑郁和焦慮樣反應(yīng)［3］。這些研究結(jié)果表明生命早期應(yīng)激可能對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育產(chǎn)生深遠(yuǎn)而持續(xù)的影響，這些影響會(huì)導(dǎo)致各種行為學(xué)異常和大腦內(nèi)長(zhǎng)時(shí)期的生物化學(xué)改變。本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用母嬰分離的動(dòng)物模型，旨在研究生命早期不良經(jīng)歷對(duì)大鼠發(fā)育過(guò)程中神經(jīng)行為學(xué)的影響。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和分組

懷孕Wistar雌鼠8只(由中山大學(xué)中山醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供)。雌鼠生產(chǎn)后在光暗周期為12 h/12 h，光照時(shí)間8:00-20:00，溫度23±2℃，濕度(52±2)%的條件下飼養(yǎng)。22 d后斷奶后每籠4只飼養(yǎng)。22 d后將新生雄性大鼠分為母嬰分離組和正常對(duì)照組，每組8只。

1.2 主要材料

ZH-ZFT型自發(fā)活動(dòng)實(shí)驗(yàn)視頻分析系統(tǒng)(安徽省淮北正華生物儀器設(shè)備有限公司)。

1.3 動(dòng)物模型的復(fù)制

母嬰分離組在新生鼠出生后的第2~15 d給予每天母嬰分離3 h的應(yīng)激刺激。將新生大鼠小心移出，放進(jìn)另外準(zhǔn)備好的鼠籠里，移至另一臨近房間，保持溫度在25.0℃±0.5℃，母鼠留在原籠中，仔鼠被帶離母鼠3 h后放回母鼠籠中，對(duì)照組正常飼養(yǎng)。模型復(fù)制均在上午(8:00AM-13:00AM)進(jìn)行。

1.4 自發(fā)活動(dòng)檢測(cè)

于仔鼠生后22(PND22)d、60 (PND60)d和90 (PND90)d的相同時(shí)間，在安靜、四周由全封閉的遮光簾隔離開(kāi)人及電腦干擾并杜絕參照物的環(huán)境條件下進(jìn)行。觀察5 min內(nèi)大鼠活動(dòng)情況。

1.5 數(shù)據(jù)處理

測(cè)定值用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(Mean±SD)表示，采用SPSS 16.0統(tǒng)計(jì)軟件分析，組間比較采用t檢驗(yàn)。以P

2 結(jié)果

母嬰分離對(duì)大鼠自發(fā)活動(dòng)的影響

22日齡大鼠：

仔鼠出生后第22日齡檢測(cè)其自發(fā)活動(dòng)。結(jié)果顯示母嬰分離組大鼠自發(fā)活動(dòng)總路程和周邊路程較對(duì)照組顯著增多(P

圖1

22日齡大鼠自發(fā)活動(dòng)各路程

60日齡大鼠：

仔鼠出生后第60日齡進(jìn)行第二次自發(fā)活動(dòng)檢測(cè)。結(jié)果顯示，母嬰分離組中央路程較對(duì)照組明顯減少(P

90日齡大鼠：

仔鼠出生后第90日齡進(jìn)行第三次自發(fā)活動(dòng)檢測(cè)。結(jié)果顯示，母嬰分離組大鼠自發(fā)活動(dòng)總路程、周邊路程、中央時(shí)間和周邊時(shí)間與對(duì)照組相比均存在顯著差異(P

圖2

60日齡大鼠自發(fā)活動(dòng)各路程

3 討論

人類(lèi)生命早期應(yīng)激，是多種精神疾病的重要風(fēng)險(xiǎn)因素，可誘發(fā)重性抑郁癥、創(chuàng)傷后應(yīng)激障礙、兒童注意缺陷癥及精神分裂癥等疾病。關(guān)于其致病機(jī)制的研究，目前主要采用動(dòng)物模型是應(yīng)用于嚙齒類(lèi)動(dòng)物的母嬰分離模型，因其符合人類(lèi)生命早期母子分離的特征，得到廣泛應(yīng)用。

自發(fā)活動(dòng)(Animal Locomotion)試驗(yàn)是觀察實(shí)驗(yàn)動(dòng)物在自然狀態(tài)下的活動(dòng)情況，在神經(jīng)精神藥理學(xué)、行為藥理學(xué)和毒理學(xué)等各個(gè)領(lǐng)域得到廣泛的應(yīng)用。有些研究認(rèn)為動(dòng)物在自發(fā)活動(dòng)實(shí)驗(yàn)中出現(xiàn)自發(fā)活動(dòng)的減少，尤其是中央?yún)^(qū)域探索活動(dòng)的減少，提示動(dòng)物表現(xiàn)為抑郁樣行為。也有研究表明，在自發(fā)活動(dòng)實(shí)驗(yàn)中動(dòng)物活動(dòng)的增加，尤其是周邊區(qū)域活動(dòng)的增多，反映動(dòng)物處于焦慮恐懼狀態(tài)。Platel等研究認(rèn)為，動(dòng)物若重復(fù)暴露在同一環(huán)境中，會(huì)出現(xiàn)對(duì)該環(huán)境的習(xí)慣化，從而表現(xiàn)在第二次重復(fù)試驗(yàn)中表現(xiàn)為自發(fā)活動(dòng)的減少，而且在第二次重復(fù)實(shí)驗(yàn)中動(dòng)物的活動(dòng)路程越少，表明其記憶能力越好。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，22 d母嬰分離組大鼠在表現(xiàn)為自發(fā)活動(dòng)總路程和周邊路程較對(duì)照組顯著增多，90 d剝奪組大鼠總路程、周邊路程和周邊時(shí)間明顯增加，中央時(shí)間明顯少于對(duì)照組。我們認(rèn)為母嬰分離應(yīng)激誘發(fā)了大鼠的焦慮樣和抑郁行為。

綜上所述，出生后經(jīng)歷生命早期應(yīng)激會(huì)影響個(gè)體的神經(jīng)發(fā)育，導(dǎo)致發(fā)育過(guò)程中及成年后行為活動(dòng)能力的受損。

參 考 文 獻(xiàn)

篇（11）

二、培養(yǎng)科學(xué)精神

1.闡明科學(xué)影響

將科研成果及其對(duì)人類(lèi)文明的影響納入教學(xué)內(nèi)容中，并介紹學(xué)科中與當(dāng)前國(guó)計(jì)民生密切關(guān)聯(lián)的知識(shí)。例如，對(duì)動(dòng)物學(xué)習(xí)行為的了解有助于動(dòng)物管理，動(dòng)物的調(diào)教多是操作式條件學(xué)習(xí)的過(guò)程，這就必須控制行為和獎(jiǎng)懲的時(shí)間間隔，研究表明在小馬咬人30秒后再懲罰無(wú)濟(jì)于事，卻會(huì)增加其對(duì)人的恐懼，充分利用幼畜的模仿學(xué)習(xí)也可以更快速有效的進(jìn)行調(diào)教。利用動(dòng)物探究行為的特點(diǎn)可以開(kāi)發(fā)相應(yīng)的養(yǎng)殖器械，不同動(dòng)物的專(zhuān)門(mén)飲水器便是最典型的應(yīng)用。通過(guò)科學(xué)應(yīng)用的講述可以使學(xué)生了解科學(xué)與人類(lèi)社會(huì)生產(chǎn)和生活的密切關(guān)系及其重大作用，激發(fā)學(xué)生對(duì)科學(xué)的興趣和造福人類(lèi)與社會(huì)的熱情。科學(xué)對(duì)社會(huì)既有正面作用也有負(fù)面影響。例如，育種科學(xué)的進(jìn)步使人工選擇的進(jìn)程大大快于自然選擇，特別是分子遺傳工程的發(fā)展使動(dòng)物承受極高強(qiáng)度的選擇壓力，而育種過(guò)程中育種目標(biāo)和生物適應(yīng)度的不一致使得動(dòng)物環(huán)境應(yīng)對(duì)能力下降，一些行為甚至出現(xiàn)異常，例如雄性火雞的能力下降、高產(chǎn)蛋雞的孵化行為減弱、高瘦肉率的皮特蘭豬應(yīng)激增多、高產(chǎn)奶牛的互吮癖等。教學(xué)過(guò)程中應(yīng)引導(dǎo)學(xué)生反思科學(xué)對(duì)自然和社會(huì)帶來(lái)的危害，使學(xué)生注意科學(xué)應(yīng)用的社會(huì)后果，引導(dǎo)學(xué)生形成正確的科學(xué)道德觀，樹(shù)立社會(huì)責(zé)任感。

2.再現(xiàn)科研歷程

科學(xué)發(fā)展歷程是不斷修正錯(cuò)誤、走向真理的過(guò)程，也是無(wú)數(shù)人付出的過(guò)程。關(guān)于蜜蜂是色盲的說(shuō)法曾經(jīng)一度流行，有人在實(shí)驗(yàn)室用變換顏色的燈對(duì)蜜蜂辨別顏色的能力做了實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)無(wú)論顏色如何變化，蜜蜂總是飛向較亮的一邊，于是認(rèn)為蜜蜂只能分辨光的強(qiáng)弱，不能分辨顏色。但動(dòng)物學(xué)家卡爾•馮•弗里希對(duì)這一結(jié)論持懷疑態(tài)度，他在自然環(huán)境中對(duì)正在采蜜的蜂作了實(shí)驗(yàn)，而且他用的不是燈，而是帶有各種顏色的紙板和不同色調(diào)的灰色紙板。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：采蜜的蜂對(duì)顏色是產(chǎn)生反應(yīng)的，特別是對(duì)黃色和藍(lán)色。之所以會(huì)得出不同的反應(yīng)，是因?yàn)槌鲇谔由鷦?dòng)機(jī)實(shí)驗(yàn)室內(nèi)的蜜蜂只會(huì)對(duì)光的強(qiáng)度產(chǎn)生反應(yīng)，所以飛向較明亮的地方，而采蜜的蜂對(duì)顏色產(chǎn)生興趣則是采蜜動(dòng)機(jī)的作用。弗里希對(duì)蜜蜂研究的最著名成就是蜜蜂的舞蹈語(yǔ)言，盡管很多人都難以相信蜜蜂具有這么奇妙的溝通能力，在生物界爭(zhēng)論多年后，最終證明他的發(fā)現(xiàn)是正確的，他也因此獲得諾貝爾獎(jiǎng)。但對(duì)于蜜蜂舞蹈的重要性現(xiàn)在仍有爭(zhēng)議，克里斯托弗•格魯特等最近的研究發(fā)現(xiàn)，在和找到食物的蜜蜂一同跳舞的那批蜜蜂中有93%的蜜蜂未能理解這只蜜蜂表達(dá)的有關(guān)食物的信息，而是飛到有其他食物來(lái)源的地方。事實(shí)上，在很多情況下，蜜蜂通常都無(wú)法搞懂跳舞的蜜蜂所傳遞的信息。有些蜜蜂甚至看了超過(guò)50遍的舞蹈，并且?guī)走M(jìn)幾出蜂巢，但最終還是未能找到食物。而以前有關(guān)蜜蜂搖擺舞的多數(shù)實(shí)驗(yàn)都是在非自然條件下實(shí)現(xiàn)的，外部環(huán)境很單一，因而蜜蜂舞蹈的表現(xiàn)也很簡(jiǎn)單。毋庸置疑，搖擺舞對(duì)蜜蜂傳遞而言確實(shí)起著一定作用，但其真實(shí)的效果尚需進(jìn)一步的研究來(lái)確定。科學(xué)發(fā)展歷程是不斷修正錯(cuò)誤、走向真理的過(guò)程，也是無(wú)數(shù)人付出的過(guò)程，對(duì)科研歷程的了解有助于學(xué)生真正理解實(shí)事求是、敢于批判、甘于奉獻(xiàn)、勇于探索的精神是科學(xué)發(fā)展的動(dòng)力。

3.突出科學(xué)美學(xué)

科學(xué)本身就蘊(yùn)涵了美，科學(xué)因其邏輯力量的內(nèi)在和諧、理論架構(gòu)的奇妙想象而具有極大的美學(xué)力量。行為學(xué)由于動(dòng)物的多樣性，其中更是蘊(yùn)含著力量之美、運(yùn)動(dòng)之美、情愛(ài)之美、和諧之美，等。例如，大部分幼年動(dòng)物，不管哺乳動(dòng)物還是鳥(niǎo)類(lèi)，大都有共同的面部特征：短臉、寬額、大眼和圓鼓鼓的雙頰，因?yàn)檫@些視覺(jué)刺激可以激發(fā)母，這體現(xiàn)了動(dòng)物的關(guān)愛(ài)之美；幼畜之間及母子之間的游戲行為則體現(xiàn)了和諧之美；雄性動(dòng)物的領(lǐng)地保護(hù)行為體現(xiàn)的則是力量之美；雄鳥(niǎo)求偶炫耀的巢則體現(xiàn)了一種精益求精的巧妙之美。當(dāng)然，不僅動(dòng)物行為本身是美的體現(xiàn)，科學(xué)探索的過(guò)程也是對(duì)完美的追求，通過(guò)突出科學(xué)中的美學(xué)可以將學(xué)生吸引到這一充滿情趣的殿堂，激發(fā)學(xué)生投身科學(xué)的興趣。

三、塑造健全人格

1.完善教學(xué)方式

重視學(xué)生的主體性，摒棄灌輸式授課，教學(xué)過(guò)程中不斷改進(jìn)教學(xué)方式以起到很好的人文教育效果。例如，啟發(fā)式教學(xué)可以調(diào)動(dòng)學(xué)生的主動(dòng)性，培養(yǎng)學(xué)生獨(dú)立思考和解決問(wèn)題的能力；探究式教學(xué)以學(xué)生為主體，通過(guò)學(xué)生自覺(jué)地、主動(dòng)地探索，掌握認(rèn)識(shí)和解決問(wèn)題的方法和步驟，使學(xué)生的主體地位、自主能力都得到加強(qiáng)；討論式教學(xué)使學(xué)生始終處于“問(wèn)題-思考-探索-解答”的積極狀態(tài)，因?qū)W生看問(wèn)題的方法不同，會(huì)有不同的觀點(diǎn)，并展開(kāi)討論，從而在不同角度來(lái)揭示科學(xué)的內(nèi)涵和基本規(guī)律可以培養(yǎng)學(xué)生的質(zhì)疑精神和創(chuàng)新精神。通過(guò)課堂分組討論和課下布置團(tuán)隊(duì)型作業(yè)，可以培養(yǎng)學(xué)生的團(tuán)隊(duì)精神、合作精神和奉獻(xiàn)精神。不同的教學(xué)方式，可以對(duì)學(xué)生人文精神的培養(yǎng)產(chǎn)生不同的作用。

2.營(yíng)造民主課堂

營(yíng)造一個(gè)良好的課堂氛圍，可以起到潛移默化的人文精神培養(yǎng)作用。通過(guò)多樣化的教學(xué)方式實(shí)施還有助于營(yíng)造一種平等、和諧、民主、寬容、打破權(quán)威的課堂氛圍，讓學(xué)生去感受、體驗(yàn)，既有助于學(xué)生產(chǎn)生對(duì)科學(xué)的熱愛(ài)和興趣，也接受了蘊(yùn)含著人文精神的專(zhuān)業(yè)教育，養(yǎng)成了活潑、寬容的品行，強(qiáng)化了民主、自由精神，人文隨知識(shí)滲透到了學(xué)生的人格中。同時(shí)，通過(guò)大量的人文知識(shí)和實(shí)踐案例激發(fā)學(xué)生的興趣，可以有效地活躍課堂氣氛，充分的課堂討論也能激發(fā)學(xué)生的注意。活躍的課堂氣氛既有助于學(xué)生的學(xué)習(xí)和記憶，也有利民主課堂氛圍的形成。

3.加強(qiáng)人文關(guān)懷

加強(qiáng)人文教育，更要在教學(xué)中體現(xiàn)人文精神，堅(jiān)持以人為本的原則，要求學(xué)生樹(shù)立以人為本的思想。以人為本，就是對(duì)人的尊重、信任和關(guān)心，把最大限度地實(shí)現(xiàn)人的價(jià)值和自由作為教育的目的，一切為學(xué)生的發(fā)展服務(wù)。在教學(xué)過(guò)程中把學(xué)習(xí)的主動(dòng)權(quán)交給學(xué)生，而不是把學(xué)生當(dāng)作加工的原料；為學(xué)生的學(xué)習(xí)起到引導(dǎo)作用，而不是指導(dǎo)，尊重學(xué)生的主體性；高度重視學(xué)生的個(gè)性差異，切實(shí)做到因材施教；樹(shù)立為學(xué)生服務(wù)的思想，關(guān)心學(xué)生的學(xué)習(xí)和生活，盡可能為學(xué)生提供幫助。